Name: linearization of the bradford protein assay
Uploaded: 2010-04-12T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Linearization of the Bradford Protein Assay at JoVE.com

<p class="jove_content"> Dit document is gewijd aan de nagedachtenis van wijlen dr. Zvi Selinger, die gastheer van de originele onderzoek hier beschreven. </p>

<p class="jove_title"> Linearisatie van de Bradford Protein ijklijn: </p><p class="jove_content"> De Coomassie briljant blauw eiwit assay, algemeen bekend als de Bradford assay <sup>1,</sup> wordt op grote schaal gebruikt vanwege de snelle en handige protocol, alsook de relatieve gevoeligheid. Helaas is er een grote mate van kromming over een breed scala van proteïne concentraties (afb. 1). Daarom is slechts een beperkt aantal relatief hoge concentraties van eiwitten, 2-10 mg / ml BSA, gebruikt voor de kalibratie grafiek, die beter past dan li...

<ol>
	<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding.">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> <em style='font-style: italic'>Anal Biochem</em>. <b>72</b>, 248-254 (1976).</li><li>Chial, H. J., Thompson, H. B., Splittgerber, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+spectral+study+of+the+charge+forms+of+Coomassie+blue+G.">A spectral study of the charge forms of Coomassie blue G.</a> <em style='font-style: italic'>Anal Biochem</em>. <b>209</b>, 258-266 (1993).</li><li>Chial, H. J., Splittgerber, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+binding+of+Coomassie+brilliant+blue+to+proteins+at+low+and+neutral+pH.">A comparison of the binding of Coomassie brilliant blue to proteins at low and neutral pH.</a> <em style='font-style: italic'>Anal Biochem</em>. <b>213</b>, 362-369 (1993).</li><li>Compton, S. J., Jones, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+dye+response+and+interference+in+the+Bradford+protein+assay.">Mechanism of dye response and interference in the Bradford protein assay.</a> <em style='font-style: italic'>Anal Biochem</em>. <b>151</b>, 369-374 (1985).</li><li>Congdon, R. W., Muth, G. W., Splittgerber, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+interaction+of+Coomassie+blue+with+proteins.">The binding interaction of Coomassie blue with proteins.</a> <em style='font-style: italic'>Anal Biochem</em>. <b>213</b>, 407-413 (1993).</li><li>Zor, T., Selinger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linearization+of+the+Bradford+protein+assay+increases+its+sensitivity:+theoretical+and+experimental+studies.">Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies.</a> <em style='font-style: italic'>Anal Biochem</em>. <b>236</b>, 302-308 (1996).</li></ol>

<p class="jove_content"> De Bradford eiwit assay is populair vanwege het gemak van de prestaties en de relatieve gevoeligheid. De linearisatie over het gehele eiwitconcentraties assortiment verkregen door het protocol hier gepresenteerde verder de assay vereenvoudigd, zoals de onbekende monsters hoeven niet te vallen binnen het bereik van de ijklijn. </p><p class="jove_content"> Belangrijk is dat de verbeterde protocol biedt verder de volgende voordelen ten opzichte van de oorspronkelijke Bradford protocol: </p><ol><li> Verhoogde nauwkeurigheid...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bradford reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad Laboratories</td>
<td>500-0006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Amersco</td>
<td>0332</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multiplate absorbance reader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioTek</td>
<td>Synergy2</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

linearization of the bradford protein assay

<p class="jove_content">Bepaling van de microgram hoeveelheden van eiwit in de Bradford Coomassie brilliant blue test wordt bereikt door het meten van absorptie bij 590 nm. Deze meest voorkomende test maakt een snelle en eenvoudige eiwitten kwantificering in cellysaten, cellulaire fracties, of recombinant eiwit samples, met het oog op normalisering van de biochemische metingen. Echter, een intrinsiek niet-lineariteit compromissen de gevoeligheid en de nauwkeurigheid van deze methode. Er wordt aangetoond dat onder standaard testomstandigheden, de verhouding van de absorbantie metingen bij 590 nm en 450 nm is strikt lineair met eiwit concentratie. Deze eenvoudige procedure verhoogt de nauwkeurigheid en verbetert de gevoeligheid van de test ongeveer een factor 10, waardoor de kwantificering tot 50 ng van runder serum albumine. Bovendien is de storing vaak geïntroduceerd door detergenten die gebruikt worden om de cellysaten creëren sterk verminderd door het nieuwe protocol. Een lineaire vergelijking ontwikkeld op basis van massa-actie en Beer de wet past perfect bij de experimentele data.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Linearization of the Bradford Protein Assay at JoVE.com

Linearization of the Bradford Protein Assay

<p class="jove_content">De nauwkeurigheid en gevoeligheid van eiwit vaststelling door de snelle en handige Bradford assay in gevaar wordt gebracht door intrinsieke niet-lineariteit. We tonen een eenvoudige procedure die linearisatie verhoogt de nauwkeurigheid, verbetert de gevoeligheid van de test ongeveer een factor 10, en vermindert de inmenging van wasmiddelen.</p>

Linearisatie van de Bradford Protein Assay

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Actine Co-Sedimentatie Assay, want de analyse van eiwit binding aan F-actine

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Detection of Protein Ubiquitination

Detectie van eiwit ubiquitinering

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Kleuring van eiwitten in Gels met Coomassie G-250 zonder organisch oplosmiddel en azijnzuur

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Met behulp van de GELFREE 8100 Fractionering System for Molecular Weight-Based Fractionering met Liquid Phase Recovery

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Een vloeibare fase Affiniteit Capture test met behulp van magnetische korrels aan eiwit-eiwit interactie te bestuderen: het poliovirus-Nanobody Voorbeeld

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

Linking Predation Risk, Herbivore Physiological Stress and Microbial Decomposition of Plant Litter

Linking predatierisico, Herbivore fysiologische stress-en Microbiële afbraak van Plant Litter

The quantity and quality of detritus entering the soil  determines the rate of decomposition by microbial communities as well as  recycle rates of ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

-Reporter gebaseerd Growth Assay voor systematische analyse van eiwitafbraak

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...

Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

Kwantitatieve immunofluorescentiebepaling op het Variatie in eiwitgehalten op centrosomes Maatregel

Centrosomes are small but important organelles that serve as the poles of mitotic spindle to maintain genomic integrity or assemble primary cilia to ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Het identificeren van eiwit-eiwit interacties sites maken met Peptide Arrays

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...