Name: maldi sample preparation: the ultra thin layer method
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method at JoVE.com

Det är mycket viktigt att bära puderfria handskar under utarbetandet av den tunna skikt. Rengöring av provet plattan <ol><li> Använd en rostfri eller guld MALDI prov plattan. </li><li> Tvätta med MeOH och torka försiktigt med en Kimwipe. Gnugga inte eller skrubba ytan med Kimwipe, för att förhindra repor på ytan. </li><li> Tvätta med H 2 O och torka försiktigt med en Kimwipe. </li><li> Tvätta med MeOH och torka försiktigt med en Kimwipe. </li><li> Vid behov, upprepa MeO...

<ol>
	<li>Xiang, F., Beavis, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+to+Increase+Contaminant+Tolerance+in+Protein+Matrix-Assisted+Laser+Desorption+Ionization+by+the+Fabrication+of+Thin+Protein-Doped+Polycrystalline+Films.">A Method to Increase Contaminant Tolerance in Protein Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization by the Fabrication of Thin Protein-Doped Polycrystalline Films.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 8, 199-204 (1994).</li><li>Cadene, M., Chait, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Robust,+Detergent-Friendly+Method+for+Mass+Spectrometric+Analysis+of+Integral+Membrane+Proteins.">A Robust, Detergent-Friendly Method for Mass Spectrometric Analysis of Integral Membrane Proteins.</a> Analytical Chemistry. 72, 5655-5658 (2000).</li><li>Hook, P., Mikami, A., Shafer, B., Chait, B. T., Rosenfeld, S. S., Vallee, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-range+allosteric+control+of+cytoplasmic+dynein+ATPase+activity+by+the+stalk+and+C-terminal+domains.">Long-range allosteric control of cytoplasmic dynein ATPase activity by the stalk and C-terminal domains.</a> J Biol Chem. 280, 33045-33054 (2005).</li></ol>

Det är viktigt att alla reagenser är av högsta kvalitet (t.ex. HPLC-kvalitet). Puderfria handskar (latex eller nitril) Rostfritt stål eller guld MALDI prov tallrik Metanol (MeOH) Vatten Kimwipes alfa-cyano-4-hydroxycinnamic syra (4-HCCA) Trifluorättiksyra (TFA) (slutlig koncentration på 0,1% H 2 O) Acetonitril (ACN) Myrsyra Isopropanol

maldi sample preparation: the ultra thin layer method

Denna video visar att förbereda en ultratunn matris / analyt lagret för att analysera peptider och proteiner av Matrix-assisterad laser desorption Ionization masspektrometri (MALDI-MS) 1, 2. Den ultra-tunna skikt metoden innebär produktion av ett substrat lager av matris kristaller (alfa-cyano-4-hydroxycinnamic acid) på provet plattan, som fungerar som en seedning grund för efterföljande kristallisation av en matris / analyt blandning. Fördelar med ultra-tunna skikt metod under andra metoder prov nedfall (t ex torkad droppe) är att det ger (i) en större tolerans mot föroreningar som salter och rengöringsmedel, (ii) bättre upplösning, och (iii) högre spatial enhetlighet. Denna metod är speciellt användbar för noggrann bestämning av massan av proteiner. Protokollet utvecklades från början och optimerad för analys av membranproteiner och används för att framgångsrikt analysera jonkanaler, metabolit transportörer och receptorer, som innehåller mellan 2 och 12 transmembrane domäner 2. Sedan den ursprungliga publiceringen, har det också visat sig vara lika användbart för analys av lösliga proteiner. Vi har faktiskt använt den för ett stort antal proteiner som har ett brett utbud av fastigheter, inklusive de med molekylära massorna så hög som 380 kDa 3. Det är för närvarande vår metod för val för molekylmassa analys av alla proteiner. Det beskrivna förfarandet ger konsekvent hög kvalitet spektra, och det är känsligt, robust och lätt att genomföra.

Watch this Scientific Journal Video about MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method at JoVE.com

MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

Denna video visar att förbereda en ultratunn matris / analyt lagret för att analysera peptider och proteiner av Matrix-assisterad laser desorption Ionization masspektrometri (MALDI-MS).

MALDI Provberedning: Ultra tunt lager Metod

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Research

JoVE Journal

Biology

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting: provberedning till Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling by Thin Layer Chromatography (TLC) Coupled with Gas-Liquid Chromatography (GLC)

Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling by Thin Layer Chromatography TLC Coupled with Gas-Liquid Chromatography GLC

Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profilering med tunnskiktskromatografi (TLC) i kombination med vätske-gaskromatografi (GLC)

Biological membranes separate cells from the environment. From a single cell to multicellular plants and animals, glycerolipids, such as ...

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Beredning av vuxna Drosophila Ögon för Thin Sektionering och mikroskopisk analys

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

Proteomic Sample Preparation from Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissue

Proteomic Provberedning från formalinfixerade och paraffininbäddade vävnads

Preserved clinical material is a unique source for proteomic investigation of human disorders. Here we describe an optimized protocol allowing large scale ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

Provberedning för Mass Cytometry Analysis

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Provberedning och avbildning av Exosomes av transmissionselektronmikroskopi

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

Miniatyriserade provberedning för transmissionselektronmikroskopi

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Stomata Tape-Peel: An Improved Method for Guard Cell Sample Preparation

Stomata Tape-Peel: En förbättrad metod för vakt Cell provberedning

The study of guard cells is essential to the knowledge of the specific contributions of this cell type to the overall function of plants. However, it is ...

Sample Preparation for Mass-spectrometry-based Proteomics Analysis of Ocular Microvessels

Provberedning för Mass-Spektrometri-baserad proteomik analys av okulär microvesselsna

The use of isolated ocular blood vessels in vitro to decipher the pathophysiological state of the eye using advanced technological approaches has greatly ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiska provberedning genom högtrycks frysning, mikrovågsugn-assisted kontrastförbättring, och Minimal harts inbäddning för volym Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...