Name: measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum
Uploaded: 2010-03-29T18:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

<p class="jove_content"> De auteur wil graag Miss Lora Matthews bedanken voor het uitvoeren van de techniek en de heer Paul Shepherd voor de cinematografie. Dit project werd gefinancierd door de Universiteit van Zuid-Australië, Laboratoriumgeneeskunde programma. </p>

<p class="jove_title"> De voorbereiding van 5x Veronal Buffered Saline (VBS) </p><ol><li> Ter voorbereiding van de Veronal gebufferde fysiologische zoutoplossing (VBS), drie afzonderlijke oplossingen moeten worden voorbereid. </li><li> Maak een oplossing een door het oplossen van 21.25gm van NaCl en 0.94gm van natrium Barbitone in 350 ml gedestilleerd water. De uiteindelijke concentratie van NaCl en Natrium Barbitone zijn 1,02 m en 13 mm respectievelijk. </li><li> Maak een oplossing 2 door het oplossen van 1.44gm van Barbitone in 125 ml warm ge...

<ol>
	<li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Immunology</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> De CH <sub>50</sub> test is onderworpen aan vele storingen. Sommige SRBC zijn kwetsbaarder dan anderen, wat resulteert in spontane hemolyse, dat is niets om de activiteit aan te vullen. De affiniteit van het konijn antilichaam varieert van partij tot partij en van een fabrikant naar de andere, dit heeft invloed op de hoeveelheid antilichaam dat bindt aan de SRBC. Ook het proces van sensibiliserende SRBC met antilichaam resultaten in cellen met verschillende hoeveelheden antilichaam coating de SRBC. Specimen verzameling ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sheep red blood cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CSL</td>
<td>2490201</td>
<td>Use at 1% final</td>
</tr>
<tr>
<td>Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Human serum</td>
</tr>
<tr>
<td>Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AdB Serotec</td>
<td>C12HSB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96 well flat bottom plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sarstedt</td>
<td>83.1839</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veronal buffered saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Use at 1x final</td>
</tr>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate reader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>37&deg;C room/incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum

<p class="jove_content">Het complement systeem is een groep eiwitten die indien geactiveerd leiden tot cel-lysis doelgroep en bevordert fagocytose door opsonisch. Individuele complement componenten kunnen worden gekwantificeerd maar dit geen informatie over de activiteit van het pad te bieden. De CH<sub&gt; 50</sub&gt; Is een screeningstest voor de activering van de klassieke complement route (fig. 1) en het is gevoelig voor de vermindering, afwezigheid en / of nalaten van enig onderdeel van de route. De CH<sub&gt; 50</sub&gt; Test de functionele capaciteit van serum complement componenten van de klassieke route van schapen rode bloedcellen (SRBC) pre-coated met konijn anti-schapen rode bloedcellen antilichaam (haemolysine) lyseren. Bij het antilichaam-gecoate SRBC worden geïncubeerd met serum te testen, de klassieke route van complement is geactiveerd en hemolyse resultaten. Als een complement component afwezig is, de CH<sub&gt; 50</sub&gt; Niveau zal nul zijn, indien een of meer onderdelen van de klassieke route wordt verlaagd, wordt CH<sub&gt; 50</sub&gt; Zal worden verlaagd. Een vast volume van optimaal gesensibiliseerd SRBC wordt toegevoegd aan elk serum verdunning. Na incubatie wordt het mengsel gecentrifugeerd en de mate van hemolyse wordt gekwantificeerd door het meten van de absorptie van het hemoglobine vrij in het supernatant bij 540nm. De hoeveelheid van complement activiteit wordt bepaald door het onderzoeken van de capaciteit van de verschillende verdunningen van het serum te testen op antilichamen gecoate SRBC lyseren. Deze video beschrijft de experimentele stappen betrokken bij de analyse van het niveau van een aanvulling op de activiteit van de klassieke complement route.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

<p class="jove_content">De klassieke route wordt geactiveerd door antilichaam en culmineert in target cel lysis. De CH<sub&gt; 50</sub&gt; Test geeft een maat voor de complement activiteit van een serummonster. Deze video toont de stappen die betrokken zijn bij het bepalen van de CH<sub&gt; 50</sub&gt; Van een serummonster, de berekeningen en het interpreteren van de resultaten.</p>

Het meten van de 50% Hemolytische Complement (CH<sub> 50</sub>) Activiteit van Serum

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH<sub>50</sub>) Activity of Serum

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Uitputting van specifieke celpopulaties door Complement Uitputting

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Het bepalen van de reactiviteit en de titer van Serum met behulp van een hemagglutinatie Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Het meten van calpaïne Activiteit in vaste en levende cellen door flowcytometrie

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with <em>Listeria monocytogenes</em>

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Het meten van bacteriën en immuunresponsen bij muizen geïnfecteerd met<em> Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Het bepalen van de fagocytaire activiteit of Clinical antilichaammonsters

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from <em>Ixodes scapularis</em> Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Speeksel, speekselklieren en hemolymfe Collectie van Ixodes scapularis Teken

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Methoden voor de kwantitatieve detectie van antilichaam-geïnduceerde complement activatie op de rode bloedcellen

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Meten Lokaal Anafylaxie in Muizen

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

Het meten van granulocyten en monocyten fagocytose en oxidatieve Burst activiteit in menselijk bloed

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

Tests voor de bestudering van de rol van Vitronectin in bacteriële hechting en een Serum

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

Het meten van de 50% Hemolytische Complement (CH 50) Activiteit van Serum

Het meten van de 50% Hemolytische Complement (CH₅₀) Activiteit van Serum