Name: measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum
Uploaded: 2010-03-29T18:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

<p class="jove_content"> Der Autor bedankt sich bei Frau Lora Matthews für die Durchführung der Technik und Herr Paul Shepherd für Kinematographie danken. Dieses Projekt wurde von der University of South Australia, Laboratoriumsmedizin Programm gefördert. </p>

<p class="jove_title"> Vorbereitung von 5x Veronal Buffered Saline (VBS) </p><ol><li> Zur Vorbereitung der Veronal-gepufferte Kochsalzlösung (VBS), müssen drei separate Lösungen vorbereitet werden. </li><li> Bereiten Sie die Lösung 1 durch Auflösen 21.25gm von NaCl und 0.94gm von Sodium barbiturathaltiges Mittel in 350ml destilliertem Wasser. Die Endkonzentrationen von NaCl und Natrium barbiturathaltiges Mittel sind 1,02 M und 13mm bzw.. </li><li> Bereiten Sie die Lösung 2 durch Lösen 1.44gm von barbiturathaltiges Mittel in 125ml destill...

<ol>
	<li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Immunology</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Die CH <sub>50-Test</sub> unterliegt vielen Störungen. Einige SRBC sind empfindlicher als andere, was zu spontanen Hämolyse, die nicht mit Aktivitäten zu ergänzen ist. Die Affinität der Kaninchen-Antikörper variiert von Charge zu Charge und von einem Hersteller zum anderen, dies beeinflusst die Höhe des Antikörper, der an der SRBC bindet. Auch der Prozess der Sensibilisierung SRBC mit Antikörper Ergebnisse in Zellen mit unterschiedlichen Mengen der Antikörper-Beschichtung der SRBC. Gewinnung und Lagerung sind ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sheep red blood cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CSL</td>
<td>2490201</td>
<td>Use at 1% final</td>
</tr>
<tr>
<td>Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Human serum</td>
</tr>
<tr>
<td>Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AdB Serotec</td>
<td>C12HSB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96 well flat bottom plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sarstedt</td>
<td>83.1839</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veronal buffered saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Use at 1x final</td>
</tr>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate reader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>37&deg;C room/incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum

<p class="jove_content">Das Komplementsystem ist eine Gruppe von Proteinen, die bei Aktivierung führen zu Zelllyse Ziel und erleichtert die Phagozytose durch Opsonisierung. Individuelle Komplement-Komponenten quantifiziert Dies bedeutet jedoch keine Auskunft über die Aktivität der Weg sein. Die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Ist ein Screening-Test für die Aktivierung des klassischen Komplementweges (Abb. 1) und es ist empfindlich auf die Reduktion, Abwesenheit und / oder Untätigkeit eines jeden Teils des Weges. Die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Tests die Funktionsfähigkeit des Serum-Komplement-Komponenten von den klassischen Weg, um rote Blutzellen von Schafen (SRBC) vorbeschichtet mit Kaninchen-Anti-Schaf-Erythrozyten-Antikörper (Hämolysin) zu lysieren. Als Antikörper-beschichteten SRBC mit Testserum, den klassischen Weg der Komplementaktivierung wird aktiviert und Hämolyse Ergebnisse inkubiert. Wenn ein Komplement-Komponente fehlt, wird der CH<sub&gt; 50</sub&gt; Ebene Null sein wird, wenn eine oder mehrere Komponenten des klassischen Weges sind zurückgegangen, die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Verringert. Ein festes Volumen von optimal sensibilisiert SRBC wird jeder Serumverdünnung aufgenommen. Nach der Inkubation wird das Gemisch zentrifugiert und der Grad der Hämolyse wird durch Messung der Absorption des Hämoglobins in den Überstand bei 540 nm freigesetzt quantifiziert. Die Höhe der Komplement-Aktivität wird durch die Untersuchung die Fähigkeit der verschiedenen Verdünnungen der Test Serum-Antikörper beschichtet SRBC lysieren bestimmt. Dieses Video beschreibt die experimentellen Schritte bei der Analyse der Ebene der Komplement-Aktivität des klassischen Komplementweges beteiligt.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

<p class="jove_content">Der klassische Weg wird durch Antikörper aktiviert und gipfelt in Ziel-Zell-Lyse. Die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Test liefert ein Maß für die Komplement-Aktivität einer Serumprobe. Dieses Video zeigt die Schritte bei der Bestimmung der CH beteiligt<sub&gt; 50</sub&gt; Einer Serumprobe, die Berechnungen und Interpretation der Ergebnisse.</p>

Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH<sub> 50</sub>) Aktivität von Serum

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH<sub>50</sub>) Activity of Serum

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Depletion spezifischer Zellpopulationen durch Ergänzung Depletion

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Die Bestimmung der Reaktivität und Titre von Serum mit einem Hämagglutinations Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Mess-Calpain Aktivität in fixierten und lebenden Zellen mittels Durchflusszytometrie

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with <em>Listeria monocytogenes</em>

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Mess-bakterielle Belastung und Immunreaktionen in Mäuse Infizierte mit<em> Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Die Bestimmung der Phagozytoseaktivität of Clinical Antikörper Proben

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from <em>Ixodes scapularis</em> Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Speichel, Speicheldrüse, und Hämolymphe Abholung Ixodes scapularis Zecken

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Methoden für die quantitative Bestimmung von Antikörper-induzierte Komplementaktivierung auf Red Blood Cells

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Mess Lokale Anaphylaxie bei Mäusen

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

Mess Granulozyten und Monozyten Phagozytose und oxidativer Burst-Aktivität im menschlichen Blut

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

Assays für die Untersuchung der Rolle von Vitronectin in bakterielle Adhäsion und Serum-Widerstand

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH 50) Aktivität von Serum

Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH₅₀) Aktivität von Serum