Name: measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum
Uploaded: 2010-03-29T18:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

<p class="jove_content"> L&#39;autore desidera ringraziare la signorina Lora Matthews per eseguire la tecnica e il signor Paolo Pastore per la cinematografia. Questo progetto è stato finanziato dalla University of South Australia, il programma di Medicina di Laboratorio. </p>

<p class="jove_title"> Preparazione di 5x Veronal Buffered Saline (VBS) </p><ol><li> Per preparare il veronal Buffered Saline (VBS), tre soluzioni separate devono essere preparati. </li><li> 1 Preparare la soluzione sciogliendo 21.25gm di NaCl e 0.94gm Barbitone di sodio in 350 ml di acqua distillata. Le concentrazioni finali di NaCl e sodio Barbitone sono 1,02 e 13 mm rispettivamente. </li><li> Preparare la soluzione 2 sciogliendo 1.44gm di Barbitone in 125ml di acqua distillata calda. La concentrazione finale di Barbitone è 62,5 mm. </li><li...

<ol>
	<li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Immunology</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Il CH <sub>50</sub> saggio è soggetta a molte interferenze. Alcuni SRBC sono più fragili di altre, con conseguente emolisi spontanea che non è correlata a completare l&#39;attività. L&#39;affinità degli anticorpi di coniglio varia da lotto a lotto e da un costruttore all&#39;altro, questo influisce sulla quantità di anticorpo che si lega alla GRP. Inoltre, il processo di sensibilizzazione SRBC con risultati anticorpi nelle cellule con quantità diverse di rivestimento degli anticorpi del GRP. Raccolta dei campioni...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sheep red blood cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CSL</td>
<td>2490201</td>
<td>Use at 1% final</td>
</tr>
<tr>
<td>Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Human serum</td>
</tr>
<tr>
<td>Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AdB Serotec</td>
<td>C12HSB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96 well flat bottom plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sarstedt</td>
<td>83.1839</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veronal buffered saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Use at 1x final</td>
</tr>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate reader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>37&deg;C room/incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum

<p class="jove_content">Il sistema del complemento è un gruppo di proteine ​​che, quando attivato portare a bersaglio la lisi cellulare e facilita la fagocitosi attraverso opsonisation. Componenti complementari individuali possono essere quantificati comunque questo non fornisce alcuna informazione circa l&#39;attività della via. Il CH<sub&gt; 50</sub&gt; È un test di screening per l&#39;attivazione della via classica del complemento (Fig. 1) ed è sensibile alla riduzione, assenza e / o di inattività di qualsiasi componente del percorso. Il CH<sub&gt; 50</sub&gt; Verifica la capacità funzionale dei componenti del complemento del siero della via classica per lisare i globuli rossi di pecora (GRP) pre-rivestiti con coniglio anti-pecora anticorpi dei globuli rossi (emolisina). Quando legate agli anticorpi SRBC vengono incubati con siero, la via classica del complemento si attiva ed i risultati emolisi. Se un componente complementare è assente, il CH<sub&gt; 50</subLivello&gt; sarà pari a zero, se uno o più componenti della via classica sono diminuiti, il CH<sub&gt; 50</sub&gt; Sarà diminuito. Un volume fisso di GRP sensibilizzati in modo ottimale è aggiunto ad ogni diluizione del siero. Dopo l&#39;incubazione, la miscela viene centrifugata e il grado di emolisi viene quantificato misurando l&#39;assorbanza della emoglobina rilasciato nel supernatante a 540nm. La quantità di attività complementare viene determinata esaminando la capacità delle varie diluizioni del siero per lisare SRBC rivestiti di anticorpi. Questo video illustra le fasi sperimentali coinvolti nell&#39;analizzare il livello di attività complemento della via classica del complemento.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

<p class="jove_content">La via classica è attivata da anticorpi e culmina nella lisi delle cellule bersaglio. Il CH<sub&gt; 50</subTest&gt; fornisce una misura dell&#39;attività complemento di un campione di siero. Questo video dimostra i passi coinvolti nella determinazione del CH<sub&gt; 50</sub&gt; Di un campione di siero, i calcoli e l&#39;interpretazione dei risultati.</p>

Misura del Complemento 50% emolitica (CH<sub> 50</sub>) Attività di siero

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH<sub>50</sub>) Activity of Serum

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

L&#39;esaurimento delle popolazioni di cellule specifiche da deplezione del complemento

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Determinazione della reattività e Titolo di siero usando un test dell&#39;emoagglutinazione

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Misurazione dell&#39;attività Calpain nelle celle fissi e Living in citometria a flusso

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with <em>Listeria monocytogenes</em>

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Misurazione della carica batterica e Risposte immunitarie in topi infettati con<em> Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Determinazione dell&#39;attività fagocitaria dei Campioni anticorpi clinici

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from <em>Ixodes scapularis</em> Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Metodi per quantitativa individuazione di anticorpi indotta da attivazione del complemento sui globuli rossi

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Misurare Anafilassi locali nei topi

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

Misurazione dei granulociti e dei monociti fagocitosi e ossidativo attività Burst nel sangue umano

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

Saggi per studiare il ruolo di Vitronectin nell'adesione batterica e sulla resistenza del siero

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

Misura del Complemento 50% emolitica (CH 50) Attività di siero

Misura del Complemento 50% emolitica (CH₅₀) Attività di siero