Name: measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum
Uploaded: 2010-03-29T18:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

<p class="jove_content"> Författaren vill tacka fröken Lora Matthews för att utföra tekniken och Paul Shepherd för filmkonst. Projektet har finansierats av University of South Australia, laboratoriemedicin programmet. </p>

<p class="jove_title"> Beredning av 5x buffrat Veronal saltlösning (VBS) </p><ol><li> För att förbereda Veronal saltlösning (VBS), tre separata lösningar behöver förberedas. </li><li> Bered en genom att lösa 21.25gm av NaCl och 0.94gm av Sodium SÖMNMEDEL i 350 ml destillerat vatten. Den slutliga koncentrationer av NaCl och natrium SÖMNMEDEL är 1,02 m och 13 mm respektive. </li><li> Bered 2 genom att lösa 1.44gm av SÖMNMEDEL i 125ml varmt destillerat vatten. Den slutliga koncentrationen av SÖMNMEDEL är 62.5mM. </li><li> Bered 3 ge...

<ol>
	<li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Immunology</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> CH <sub>50-analysen</sub> är föremål för många störningar. Några SRBC är mer ömtåliga än andra, vilket resulterar i spontana hemolys som inte har med komplement aktivitet. Affinitet kanin antikroppar varierar från parti till parti och från en tillverkare till en annan, vilket påverkar mängden antikroppar som binder till SRBC. Även arbetet med sensibiliserande SRBC med antikropp resulterar i celler med olika mängder antikroppar beläggning SRBC. Provtagning och lagring är en viktig potentiell källa til...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sheep red blood cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CSL</td>
<td>2490201</td>
<td>Use at 1% final</td>
</tr>
<tr>
<td>Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Human serum</td>
</tr>
<tr>
<td>Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>AdB Serotec</td>
<td>C12HSB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96 well flat bottom plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sarstedt</td>
<td>83.1839</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veronal buffered saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Use at 1x final</td>
</tr>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate reader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>37&deg;C room/incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

measuring the 50% haemolytic complement (ch<sub>50</sub>) activity of serum

<p class="jove_content">Komplementsystemet är en grupp av proteiner som när den aktiveras leder till målcellen lys och underlättar fagocytos genom opsonisation. Individuella komplement komponenter kan kvantifieras men detta inte ger någon information om verksamheten i vägen. CH<sub&gt; 50</sub&gt; Är en screening test för aktivering av den klassiska komplement vägen (figur 1) och den är känslig för minskning, frånvaro och / eller inaktivitet av någon del av vägen. CH<sub&gt; 50</sub&gt; Testar funktionsförmåga av serum komplement komponenter i den klassiska vägen till lyse får röda blodkroppar (SRBC) före belagda med kanin anti-får röda blodkroppar antikroppar (haemolysin). När antikroppsförsedda SRBC inkuberas med serum, den klassiska vägen av komplement aktiveras och resultat hemolys. Om ett komplement komponent är frånvarande, CH<sub&gt; 50</sub&gt; Nivå blir noll, om en eller flera delar av den klassiska vägen är minskat, CH<sub&gt; 50</sub&gt; Kommer att minskas. En bestämd volym optimalt sensibiliserade SRBC läggs till varje serum utspädning. Efter inkubation centrifugeras blandningen, och graden av hemolys kvantifieras genom att mäta absorbansen för hemoglobin ut i supernatanten vid 540nm. Mängden komplement verkan bestäms genom att undersöka kapaciteten i olika spädningar av testserum till lyse antikroppsförsedda SRBC. Denna video beskriver de experimentella stegen i att analysera graden av komplement aktiviteten av den klassiska komplement väg.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum at JoVE.com

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

<p class="jove_content">Den klassiska vägen aktiveras av antikroppar och kulminerar i mål cellslys. CH<sub&gt; 50</sub&gt;-Analysen ger ett mått på den kompletterar verksamheten i ett serumprov. Denna video visar de olika stegen i fastställandet av CH<sub&gt; 50</sub&gt; Av ett serumprov, beräkningar och tolkning av resultat.</p>

Mätning av 50% Hemolytisk Komplement (CH<sub> 50</sub>) Aktivitet av serum

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH<sub>50</sub>) Activity of Serum

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Utarmning av specifika cellpopulationer med Komplettera Utarmning

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Fastställande av reaktivitet och titer av serum med hjälp av en hemagglutination analys

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Mätning Calpain aktivitet inom fast och levande celler med flödescytometri

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with <em>Listeria monocytogenes</em>

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Att mäta bakteriehalten och immunsvar hos möss som blivit infekterade med<em> Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Fastställande av fagocyterande förmåga för klinisk Antibody prover

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from <em>Ixodes scapularis</em> Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliv, spottkörtel och hemolymfa Collection från Ixodes scapularis fästingar

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Metoder för kvantitativ detektion av antikroppsinducerad komplementaktivering på röda blodkroppar

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Mätning Lokala Anafylaxi i möss

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

Mätning Granulocyt och monocyt Fagocytos och Oxidativ Burst Aktivitet i humant blod

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

Analyser för studerar roll för Aktiebolaget Trav &amp; galopp i bakteriell vidhäftning och Serum motstånd

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

Mätning av 50% Hemolytisk Komplement (CH 50) Aktivitet av serum

Mätning av 50% Hemolytisk Komplement (CH₅₀) Aktivitet av serum