Name: transplantation of gfp-expressing blastomeres for live imaging of retinal and brain development in chimeric zebrafish embryos
Uploaded: 2010-07-19T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos at JoVE.com

Deze studie werd ondersteund door een National Institutes of Health (NIH) Core Grant (5P30EY008098) en de volgende middelen om XW: NIH Grant R01EY016099 en Onderzoek naar Blindness Career Development Award Prevent. Wij danken Kira Lathrop voor hulp bij confocale beeldvorming.

Dag 1. Voorbereiding 1. Stel vis kruis Stel paarsgewijze kruisingen van zebravis in de avond. Om te voorkomen dat willekeurige paring voor de gewenste tijd, gebruik verdelers om de mannelijke en vrouwelijke vissen in de paring cassettes te scheiden. GFP expressie transgene vis wordt gebruikt als een bron van donor blastomeren. De pt104 transgene lijn (Zou et al.., 2008), hier gebruikt, drukt GFP alomtegenwoordig onder de controle van de EF1 promotor. GFP expr...

<ol>
	<li>Zou, J., Lathrop, K., Sun, M., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+RPE+maintained+by+Nok+is+essential+for+retinal+epithelial+polarity+and+cellular+patterning+in+zebrafish.">Intact RPE maintained by Nok is essential for retinal epithelial polarity and cellular patterning in zebrafish.</a> Journal of Neuroscience. 28 (50), 13684-13695 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).</li><li>Ho, R. K., Kane, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-autonomous+action+of+zebrafish+spt-1+mutation+in+specific+mesodermal+precursors.">Cell-autonomous action of zebrafish spt-1 mutation in specific mesodermal precursors.</a> Nature. 348, 728-730 (1990).</li><li>Catalano, A., Raymond, P., Goldman, D., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+dou+yan+Mutation+Causes+Patterning+Defects+and+Extensive+Cell+Death+in+the+Retina.">Zebrafish dou yan Mutation Causes Patterning Defects and Extensive Cell Death in the Retina.</a> Developmental Dynamics. 236 (5), 1295-1236 (2007).</li></ol>

In deze video tonen we een methode voor blastomeer transplantatie in het netvlies en de ontwikkeling van de hersenen te analyseren in de zebravis. Dit protocol kan ook worden gebruikt om de ontwikkeling van andere weefsels en organen te analyseren door simpelweg het vrijgeven van de donor blastomeren overeenkomstige plaatsen in de ontvangende embryo&#39;s. De etikettering met GFP moleculen levert een schonere achtergrond dan labeling met fluorescente kleurstof-geconjugeerde Dextran (Ho en Kane 1990). Dit komt omdat het ...

E3 ei water: <ul><li> 5 mM NaCl </li><li> 0,17 mM KCl </li><li> 0,33 mM CaCl 2 </li><li> 0,33 mM MgSO 4 </li><li> 0,1% methyleenblauw </li></ul>

transplantation of gfp-expressing blastomeres for live imaging of retinal and brain development in chimeric zebrafish embryos

Cellen veranderen uitgebreid in hun locaties en vastgoed tijdens de embryogenese. Deze veranderingen worden geregeld door de interacties tussen de cellen en hun omgeving. Chimère embryo&#39;s, die zijn samengesteld uit cellen van verschillende genetische achtergrond, zijn grote hulpmiddelen om de cel-cel interacties gemedieerd door genen van belang te bestuderen. De embryonale transparantie van de zebravis in vroege ontwikkelingsstadia maakt directe visualisatie van de morfogenese van weefsels en organen op cellulair niveau. Hier tonen we een protocol om chimerisch netvlies en de hersenen in zebravis embryo&#39;s te genereren en te leven beeldvorming van de donor cellen uit te voeren. Het protocol heeft betrekking op de voorbereiding van de transplantatie naalden, de transplantatie van GFP-expressie donor blastomeren om GFP-negatieve gastheren, en het onderzoek van de donor cel gedrag onder wonen confocale microscopie. Met lichte wijzigingen, kan dit protocol ook gebruikt worden om de embryonale ontwikkeling van andere weefsels en organen in de zebravis studie. De voordelen van het gebruik van GFP te labelen donor cellen worden ook besproken.

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos at JoVE.com

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Demonstreren we een protocol om chimere zebravis embryo&#39;s te genereren voor live-imaging cellulaire gedrag tijdens de embryogenese.

Transplantatie van GFP-expressie blastomeren voor Live Beeldvorming van het netvlies en de ontwikkeling van de hersenen in chimère zebravis embryo&#39;s

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Twee-foton axotomy en time-lapse confocale imaging in levende zebravis embryo&#39;s

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Live-Imaging van de zebravis embryonale Brain door confocale microscopie

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Het genereren van Chimère zebravis embryo&#39;s door transplantatie

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Live-Imaging van celbeweeglijkheid en actine cytoskelet van individuele neuronen en neurale cellen in de zebravis embryo&#39;s

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Development of automated imaging and analysis for zebrafish chemical screens.

Ontwikkeling van geautomatiseerde beeldvorming en analyse voor de zebravis chemische schermen.

We demonstrate the application of image-based high-content screening (HCS) methodology to identify small molecules that can modulate the FGF/RAS/MAPK ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Twee-foton-Based Fotoactivatie in de Live zebravis embryo&#39;s

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Dechorionation of Medaka Embryos and Cell Transplantation for the Generation of Chimeras

Dechorionation van Medaka Embryo&#39;s en Cell Transplantation voor de generatie van chimaeren

Medaka is a small egg-laying freshwater fish that allows both genetic and embryological analyses and is one of the three vertebrate model organisms in ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Imaging glycanen in zebravis embryo&#39;s door metabole Labeling en Bioorthogonal Klik Chemie

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Wonen Imaging van apoptotische cel Clearance tijdens<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenese

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Analyse van oxidatieve stress in zebravis embryo&#39;s

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...