Name: transplantation of gfp-expressing blastomeres for live imaging of retinal and brain development in chimeric zebrafish embryos
Uploaded: 2010-07-19T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos at JoVE.com

Cette étude a été soutenue par un National Institutes of Health (NIH) Core Grant (5P30EY008098) et les fonds suivants au XW: des subventions du NIH et de la Recherche R01EY016099 visant à prévenir la cécité Prix du développement de carrière. Nous remercions Lathrop Kira à l&#39;aide de l&#39;imagerie confocale.

Jour 1. Préparation 1. Mettre en place des croix de poisson Mettre en place des croix paires du poisson zèbre dans la soirée. Pour empêcher l&#39;accouplement au hasard avant l&#39;heure désirée, l&#39;utilisation des diviseurs de séparer les poissons féminins et masculins dans les cassettes d&#39;accouplement. Exprimant la GFP poissons transgéniques sont utilisés comme une source de blastomères donateurs. La ligne pt104 transgéniques (Zou et al.,...

<ol>
	<li>Zou, J., Lathrop, K., Sun, M., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+RPE+maintained+by+Nok+is+essential+for+retinal+epithelial+polarity+and+cellular+patterning+in+zebrafish.">Intact RPE maintained by Nok is essential for retinal epithelial polarity and cellular patterning in zebrafish.</a> Journal of Neuroscience. 28 (50), 13684-13695 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).</li><li>Ho, R. K., Kane, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-autonomous+action+of+zebrafish+spt-1+mutation+in+specific+mesodermal+precursors.">Cell-autonomous action of zebrafish spt-1 mutation in specific mesodermal precursors.</a> Nature. 348, 728-730 (1990).</li><li>Catalano, A., Raymond, P., Goldman, D., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+dou+yan+Mutation+Causes+Patterning+Defects+and+Extensive+Cell+Death+in+the+Retina.">Zebrafish dou yan Mutation Causes Patterning Defects and Extensive Cell Death in the Retina.</a> Developmental Dynamics. 236 (5), 1295-1236 (2007).</li></ol>

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode pour la transplantation blastomère d&#39;analyser le développement de la rétine et du cerveau chez le poisson zèbre. Ce protocole peut également être utilisé pour analyser le développement des autres tissus et organes, simplement en libérant les blastomères donateurs à des emplacements correspondants dans les embryons hôte. L&#39;étiquetage avec des molécules GFP donne un nettoyant de fond que l&#39;étiquetage avec colorant fluorescent conjugué Dextran (Ho...

L&#39;eau d&#39;œuf E3: <ul><li> 5 mM de NaCl </li><li> 0,17 mM de KCl </li><li> 0,33 mM de CaCl2 </li><li> 0,33 mM MgSO 4 </li><li> Bleu de méthylène 0,1% </li></ul>

transplantation of gfp-expressing blastomeres for live imaging of retinal and brain development in chimeric zebrafish embryos

Cellules changement abondamment dans leurs emplacements et des biens lors de l&#39;embryogenèse. Ces changements sont réglementés par les interactions entre les cellules et leur environnement. Embryons chimériques, qui sont composés de cellules du fond génétique différent, sont d&#39;excellents outils pour étudier les interactions cellule-cellule médiée par des gènes d&#39;intérêt. La transparence des embryons de poisson zèbre au premiers stades de développement permet la visualisation directe de la morphogenèse des tissus et des organes au niveau cellulaire. Ici, nous démontrons un protocole visant à générer des rétines chimérique et le cerveau chez l&#39;embryon de poisson zèbre et d&#39;effectuer l&#39;imagerie en direct de cellules du donneur. Le protocole couvre la préparation des aiguilles greffe, la transplantation de blastomères exprimant la GFP donateurs à la GFP-négatif hôtes, et l&#39;examen du comportement des cellules des donneurs en microscopie confocale vivre. Avec de légères modifications, ce protocole peut également être utilisée pour étudier le développement embryonnaire des autres tissus et organes chez le poisson zèbre. Les avantages d&#39;utiliser la GFP aux cellules du donneur d&#39;étiquettes sont également discutés.

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Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Nous démontrons un protocole visant à générer des embryons de poissons zèbres chimérique pour l&#39;imagerie cellulaire comportements direct durant l&#39;embryogenèse.

La transplantation de blastomères exprimant la GFP pour l&#39;imagerie en direct sur le développement de la rétine et du cerveau dans les embryons de poissons zèbres chimériques

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Deux photons axotomie et time-lapse imagerie confocale dans embryons de poissons zèbres vivent

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Recherche

Biologie

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

En direct l&#39;imagerie du cerveau de poisson zèbre embryonnaires par microscopie confocale

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Génération embryons de poissons zèbres chimériques par transplantation

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Imagerie en temps réel de la motilité cellulaire et cytosquelette d&#39;actine des neurones individuels et de la crête neurale dans les embryons de poissons zèbres

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Development of automated imaging and analysis for zebrafish chemical screens.

Développement de l&#39;imagerie automatisée et d&#39;analyse pour les écrans chimiques du poisson zèbre.

We demonstrate the application of image-based high-content screening (HCS) methodology to identify small molecules that can modulate the FGF/RAS/MAPK ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Deux-Photon-Based photoactivation dans Live embryons de poissons zèbres

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Dechorionation of Medaka Embryos and Cell Transplantation for the Generation of Chimeras

Dechorionation d&#39;embryons Medaka et la transplantation de cellules pour la production de chimères

Medaka is a small egg-laying freshwater fish that allows both genetic and embryological analyses and is one of the three vertebrate model organisms in ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Glycanes imagerie dans embryons de poissons zèbres par marquage métabolique et Chimie Cliquez Bioorthogonal

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Vivre imagerie de dédouanement cellulaire par apoptose au cours<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenèse

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Analyse du stress oxydatif dans embryons de poissons zèbres

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...