Name: transplantation of gfp-expressing blastomeres for live imaging of retinal and brain development in chimeric zebrafish embryos
Uploaded: 2010-07-19T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos at JoVE.com

Erişmiş R01EY016099 ve Araştırma Körlük Kariyer Geliştirme Ödülü Engellenir: Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH) Çekirdek Grant (5P30EY008098) ve aşağıdaki fonlar XW tarafından desteklenmiştir. Kira Lathrop konfokal görüntüleme yardım için teşekkür ederim.

1. Gün. Hazırlık 1. Balık haçlar Akşam zebrafish ikili haç ayarlayın. Istenilen süre önce rastgele çiftleşme önlemek için, kadın ve erkek balık çiftleşme kasetleri ayrı bölücüler kullanın. GFP ifade transgenik balık donör blastomer kaynağı olarak kullanılır. Pt104 transgenik hattı (Zou ve ark, 2008), burada kullanılan EF1 promotör kontrolü altında yayg GFP ifade eder. GFP ifade donör hücreleri canlı görüntüleme görsell...

<ol>
	<li>Zou, J., Lathrop, K., Sun, M., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+RPE+maintained+by+Nok+is+essential+for+retinal+epithelial+polarity+and+cellular+patterning+in+zebrafish.">Intact RPE maintained by Nok is essential for retinal epithelial polarity and cellular patterning in zebrafish.</a> Journal of Neuroscience. 28 (50), 13684-13695 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).</li><li>Ho, R. K., Kane, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-autonomous+action+of+zebrafish+spt-1+mutation+in+specific+mesodermal+precursors.">Cell-autonomous action of zebrafish spt-1 mutation in specific mesodermal precursors.</a> Nature. 348, 728-730 (1990).</li><li>Catalano, A., Raymond, P., Goldman, D., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+dou+yan+Mutation+Causes+Patterning+Defects+and+Extensive+Cell+Death+in+the+Retina.">Zebrafish dou yan Mutation Causes Patterning Defects and Extensive Cell Death in the Retina.</a> Developmental Dynamics. 236 (5), 1295-1236 (2007).</li></ol>

Bu video, blastomer nakli zebrafish retina ve beyin gelişimini analiz etmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Bu protokol aynı zamanda ilgili yerlere sadece ev sahibi embriyolar donör blastomer bırakmadan diğer doku ve organların gelişimini analiz etmek için kullanılabilir. GFP molekülleri ile etiketleme, floresan boya konjuge Dextran&#39;ın (Ho ve Kane 1990) ile etiketleme daha temiz bir arka plan verir. Bu ölü donör hücreleri Dextran&#39;ın boyaların enkaz böylece görüntüleme (Catalano ve...

E3 yumurta su: <ul><li> 5 mM NaCl </li><li> 0.17 mM KCl </li><li> 0.33 mM CaCl 2 </li><li> 0.33 mM MgSO 4 </li><li> % 0.1 &#39;lik metilen mavisi </li></ul>

transplantation of gfp-expressing blastomeres for live imaging of retinal and brain development in chimeric zebrafish embryos

Hücreler embriyogenez sırasında konumlarını ve mal yaygın olarak değişir. Bu değişiklikler hücre ve çevreleri arasındaki etkileşimler tarafından düzenlenir. Farklı genetik arka plan hücreleri oluşur Kimerik embriyolar, genler tarafından ilgi aracılı hücre-hücre etkileşimleri çalışmak için mükemmel araçlardır. Erken gelişim aşamasında zebrafish embriyonik şeffaflık, hücresel düzeyde, doku ve organların morfolojilerinden doğrudan görselleştirme izin verir. Burada, zebrafish embriyolar kimerik retina ve beyin oluşturmak ve donör hücreleri canlı görüntüleme gerçekleştirmek için bir protokol göstermektedir. Protokol nakli iğneler, nakli hazırlık kapsar GFP ifade GFP-negatif ana donör blastomer ve canlı konfokal mikroskobu altında donör hücre davranışlarının incelenmesi. Hafif değişiklikler, bu protokolü de embriyonik gelişim zebrafish diğer doku ve organları incelemek için kullanılan olabilir. Etiket donör hücreleri GFP kullanmanın avantajları da tartışılır.

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos at JoVE.com

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Biz embriyogenez sırasında canlı görüntüleme hücresel davranışı için kimerik zebrafish embriyolar üretmek için bir protokol ortaya koymaktadır.

Transplantasyon GFP of-Kimerik Zebra balığı Embriyolar Retina ve Beyin Gelişimi Canlı Görüntüleme blastomer ifade

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

İki foton axotomy ve zaman atlamalı konfokal görüntüleme canlı zebrafish embriyolar

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Transplantasyon Kimerik Zebra balığı Embriyolar Yaratma

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Zebra balığı Embriyolar Bireysel Nöronlar ve Sinir Crest Hücreler Aktin Sitoiskelet Hücre Motilite ve Canlı Görüntüleme

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Development of automated imaging and analysis for zebrafish chemical screens.

Zebrafish kimyasal ekranlar için otomatik görüntüleme ve analiz geliştirilmesi.

We demonstrate the application of image-based high-content screening (HCS) methodology to identify small molecules that can modulate the FGF/RAS/MAPK ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Canlı Zebra balığı Embriyolar iki-Foton-Tabanlı fotoaktivasyon

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Dechorionation of Medaka Embryos and Cell Transplantation for the Generation of Chimeras

Chimeras Üretim Medaka Embriyolar ve Hücre Nakli Dechorionation

Medaka is a small egg-laying freshwater fish that allows both genetic and embryological analyses and is one of the three vertebrate model organisms in ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Metabolik Etiketleme ve Bioorthogonal tıklayın Kimya Zebra balığı Embriyolar Görüntüleme glukanlardır

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Zebra balığı Embriyolar Oksidatif Stres Analizi

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...