Name: deficient pms2, ercc1, ku86, ccoi in field defects during progression to colon cancer
Uploaded: 2010-07-28T17:00:00
Duration: 28 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer at JoVE.com

Финансовые средства, предоставленные Южной Аризоне делам ветеранов Система здравоохранения В. А. заслуги Обзор грантов 0142 и Аризона биомедицинских исследований комиссии грант 0803.

<ol>
	<li>Slaughter, D. P., Southwick, H. W., Smejkal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+cancerization+in+oral+stratified+squamous+epithelium;+clinical+implications+of+multicentric+origin.">Field cancerization in oral stratified squamous epithelium; clinical implications of multicentric origin.</a> Cancer. 6, 963-968 (1953).</li><li>Vauthey, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+field+cancerisation+in+clinical+oncology.">Importance of field cancerisation in clinical oncology.</a> Lancet Oncol. 1, 15-16 (2000).</li><li>Bernstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+defects+in+progression+to+gastrointestinal+tract+cancers.">Field defects in progression to gastrointestinal tract cancers.</a> Cancer Lett. 260, 1-10 (2008).</li><li>Calabrese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+pretumor+progression+before+and+after+loss+of+DNA+mismatch+repair.">Colorectal pretumor progression before and after loss of DNA mismatch repair.</a> Am J Pathol. 164, 1447-1453 (2004).</li><li>Bernstein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+Pms2+expression+in+non-neoplastic+flat+mucosa+from+patients+with+colon+cancer+correlates+with+reduced+apoptosis+competence.">Reduced Pms2 expression in non-neoplastic flat mucosa from patients with colon cancer correlates with reduced apoptosis competence.</a> Appl Immunohistochem Mol Morphol. 14, 166-172 (2006).</li><li>Huang, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1+is+a+marker+for+normal+and+malignant+human+colonic+stem+cells+(SC)+and+tracks+SC+overpopulation+during+colon+tumorigenesis.">Aldehyde dehydrogenase 1 is a marker for normal and malignant human colonic stem cells (SC) and tracks SC overpopulation during colon tumorigenesis.</a> Cancer Res. 69, 3382-3389 (2009).</li><li>Kim, K. M., Shibata, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylation+reveals+a+niche:+stem+cell+succession+in+human+colon+crypts.">Methylation reveals a niche: stem cell succession in human colon crypts.</a> Oncogene. 21, 5441-5449 (2002).</li><li>Greaves, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+mutations+are+established+in+human+colonic+stem+cells,+and+mutated+clones+expand+by+crypt+fission.">Mitochondrial DNA mutations are established in human colonic stem cells, and mutated clones expand by crypt fission.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 103, 714-719 (2006).</li><li>Nara, K., Nagashima, F., Yasui, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+elevated+ultraviolet-induced+mutation+frequency+in+isolated+Chinese+hamster+cell+lines+defective+in+nucleotide+excision+repair+and+mismatch+repair+proteins.">Highly elevated ultraviolet-induced mutation frequency in isolated Chinese hamster cell lines defective in nucleotide excision repair and mismatch repair proteins.</a> Cancer Res. 61, 50-52 (2001).</li><li>Payne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+induces+mitochondrial+oxidative+stress+and+activates+NF-kB+through+multiple+mechanisms+in+HCT-116+colon+epithelial+cells.">Deoxycholate induces mitochondrial oxidative stress and activates NF-kB through multiple mechanisms in HCT-116 colon epithelial cells.</a> Carcinogenesis. 28, 215-222 (2007).</li><li>Lim, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+changes+induced+by+reactive+oxygen+species+in+hepatocellular+carcinoma:+methylation+of+the+E-cadherin+promoter.">Epigenetic changes induced by reactive oxygen species in hepatocellular carcinoma: methylation of the E-cadherin promoter.</a> Gastroenterology. 135, 2128-2140 (2008).</li><li>Bernstein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+as+carcinogens+in+human+gastrointestinal+cancers.">Bile acids as carcinogens in human gastrointestinal cancers.</a> Mutat Res. 589, 47-65 (2005).</li><li>Payne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hydrophobic+bile+acids,+genomic+instability,+Darwinian+selection,+and+colon+carcinogenesis.">hydrophobic bile acids, genomic instability, Darwinian selection, and colon carcinogenesis.</a> Clinical and Experimental Gastroenterology. 1, 19-47 (2008).</li></ol>

<ol><li> Очень важно иметь 3 срезов ткани на слайд. Пузыри могут возникнуть при применении средств массовой информации проведение антител, так что некоторые склепы или части крипты не может быть адекватно окрашенных только потому, что пузырь предотвратить антитела из реагирующих с срез ткани. Гробницы около 60 мкм в диаметре, и срезах тканей являются 4 микрон, поэтому не может быть больше, чем 15 разделами ткани через тот же склепе. Как правило, можно найти же склепе, с использованием морфологии склепе в качестве руководства, на несколько разделов ткани помещают на предметное стекло. </li><li> В наших последних исследований, для больших образцов тканей, окрашивание в Sequenza не может дать хороший охват антитела к ткани. В этих случаях, можно предпочитает использовать ручной окраски ткани, где капля средах, содержащих антитела ручной размещены на каждый образец ткани. </li><li> Чтобы ясно видеть, коричневого окрашивания показывает выражение immunostained белка и синего окрашивания показывает ядерной ДНК на мониторе компьютера, программное обеспечение Motic photomicroscope регулируется следующим образом: Gain 0, смещение 0, расширение 0, 255, 1,00 Гамма, 0, Резкость 1, цветокоррекция 7, R, G, B Gain 1,00 и R, G, B Яркость 0. Установлено разрешение на 1024 x 768, и баланс белого включена. </li><li> Наш метод может быть использован с любым белков считается важным в прогрессии рака толстой кишки, чтобы оценить их частоту дефицита, или, возможно, избыточная экспрессия, в поле дефектов окружающих рака толстой кишки или аденомы с передовыми неоплазии. </li><li> Поле дефекты часть прогрессирования рака Термин &quot;поле cancerization&quot; был впервые использован Слотер и соавт. В 1953 году 1 для описания области или «поле» эпителия, которая была обусловлена ​​в значительной степени неизвестны процессы (в то время) так, чтобы она предрасполагает к развитию рака. Первого использования была в контексте рака ротовой полости. С тех пор термин &quot;поле cancerization&quot; и &quot;поле дефекта&quot; были более широко использовать для описания каких-либо предварительных злокачественных тканей, в которых новые рака чаще возникают, и понятие поля cancerization в клинической онкологии уделяется все больше внимания 2 . Недавно мы рассмотрели фактические данные для полевых дефектов двенадцатиперстной кишки 3. Включенные в обзор, были результаты десятков исследований предоставление доказательств поля дефектов в толстой кишке. Поле дефектов слизистой оболочки толстой кишки, вероятно, возникают в результате естественного отбора мутантных клеток или эпигенетически измененных клеток среди стволовые клетки из склепа, что одна стволовая клетка выживает 4 нишу подряд. Генетическая нестабильность или мутатор фенотип, возможно, за счет сокращения нуклеотидов ДНК репарации ДНК или несоответствие ремонта, было бы ускорить этот процесс (и частый дефект Pms2 сообщалось ранее, в районах, прилегающих рака толстой кишки 5). Если в нормальной популяции стволовых клеток в слизистой оболочки толстой кишки, клетка приобретает селективное преимущество за счет мутации или epimutation, она будет иметь тенденцию к расширению клонально за счет соседних стволовых клеток. В слизистой оболочки толстой кишки, ниши стволовых клеток занимает ≤ 5 клеток 6, которые затем дают начало всем (около 2000) клеток крипт. Захват ниши стволовых клеток от мутанта или эпигенетически изменен тип клеток приводит к &quot;склеп преобразования&quot; 7. Распространения мутировавших клонов (в пересчете склепов) в толстой эпителия могут чаще всего происходят на склеп деления 8. Примером склеп деления показано на рисунке 2. Таким образом, участок аномальной ткани возникает. В рамках такой патч, вторая такая мутация может произойти так, что данный склеп приобретает преимущество по сравнению с другими склепов в патч, и этот склеп будет расширяться клонально формирования вторичных патч в оригинальной заплаткой. В рамках этого нового патча, процесс может повторяться несколько больше времени, возможно, на протяжении десятилетий, вплоть до злокачественных стволовых клеток возникает клонально который расширяется в рак. Если это общий процесс, при котором отдельные толстой аденокарциномы возникают, то обычно аденокарциномы толстой должен быть связан с, и должна предшествовать, поля аномалий. Таким образом участок преобразован склепов можно было бы ожидать, чтобы обнаружить дефекты в районе, прилегающем аденомы с передовыми неоплазии или окружающих рака толстой кишки. Из этой модели предварительно опухолевой прогрессии, можно было бы ожидать, чтобы найти генетические или эпигенетические изменения, связанные с предварительной опухолевой прогрессии среди образцов тканей, взятых из неопухолевых слизистой оболочки толстой кишки в районах, прилегающих опухолевых поражений толстой кишки, которые могут прогрессировать до рака . В частности, дефекты ферментов репарации ДНК, или белки, необходимые для апоптоза, будет способствовать прогрессии, увеличивая нестабильность генома, и можно было бы ожидать, чтобы найти в дефектной области. </li><li> Выбор за дефицита Pms2 когда клетки гeficient для ERCC1 и подвергнут ДНК-повреждающего агента Нара и др. 9. Вырос на 25 культурах клеток китайского яичника хомяка 43-3B, все с мутацией гена инактивации ДНК ремонт ERCC1 и обрабатывают культуры с повреждающим ДНК, MNNG. Среди выживших клетках лечения повреждений ДНК, одна ячейка была выделена из каждой культуры и позволили сформировать клон. Все клоны были изолированы в 10 раз более устойчивы к убийству MNNG, чем родительский штамм. Из клонов изолированные, 22 были доказаны будут обнаружены дефекты в ДНК, коррекционная репарация (MMR). Пять из этих 22 клонов были протестированы с помощью секвенирования, и три из пяти были недостаточно для Pms2. Этот выбор за дефекта в Pms2 был предположительно из-за дефицита Pms2 вызвало сопротивление апоптоз, и, следовательно, способность к выживанию добавил повреждения ДНК в клетках, остальные, когда ERCC1 отсутствовал. (Обычно, Pms2 чувств повреждения ДНК уровнях, и заставляет клетки подвергаются апоптозу при повреждении ДНК является чрезмерным.) Таким образом, дефицит Pms2 выбран для того, когда ERCC1-дефицитных клеток подвергаются повреждения ДНК. Клоны дефектный в обеих ERCC1 и Pms2 были показаны около 500 до 1000 раз больше мутаций при облучении УФ, чем родительских клеток. </li><li> Желчные кислоты вызывают окислительный стресс, являются ДНК повреждающих агентов и играют важную роль в прогрессии рака толстой кишки Deoxycholic кислоты, желчных кислот, повышает окислительный стресс путем образования активных форм кислорода (АФК) несколько процессов, в том числе повреждение митохондрий 10. Существует доказательство того, что последние АФК причиной эпигенетические изменения 11, и по меньшей мере 15 исследований показали, что желчные кислоты, при повышенной концентрации сопровождающих высоким содержанием жиров, вызывают повреждения ДНК 12. Как рассмотрены Бернштейн и др. 12. Существует положительная связь между диетическим потреблением жира и частотой рака толстой кишки. Желчные кислоты выделяются в желудочно-кишечном тракте в ответ на жиры в рационе, и желчные кислоты выступают в качестве моющих средств, чтобы помочь в переваривании жиров. Таким образом, высоким содержанием жиров связано с увеличением секреции желчных кислот. Фекальные концентрации желчных кислот повышается в группах населения с высокой частотой рака толстой кишки, и чрезмерное воздействие желчных кислот, считается основным фактором риска развития толстой кишки канцерогенеза 13. Желчные кислоты могут быть причиной поле дефектов в толстой кишке. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1931/1931fig2.jpg" alt="Рисунок 2" /> Рисунок 2. Толстой делящихся склепе на 3 склепов. Заключение Мы обнаружили высокую частоту склепы дефицит репарации ДНК генов ERCC1 и Pms2 (Pms2 также необходим для апоптоза) в больших дефектов поля, окружающего рака толстой кишки. Недостатки в ERCC1 и Pms2 (из-за эпигенетические изменения или мутации) могут быть первые шаги в генетической нестабильности центральное прогрессирование рака толстой кишки.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PMS2 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>556415</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ERCC1 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher</td>
<td>MS-671-P1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ku86 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Santa Cruz Biotech.</td>
<td>SC-9034</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CcO1 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>459600</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotinylated secondary</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>E0413</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>22% BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Informagen, Inc.</td>
<td>2327</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sniper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biocare Medical</td>
<td>BS966</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectastain ABC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>PK-6100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>34001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween 20</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USB</td>
<td>20605</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cytoseal XYL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>48212-196</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trizma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T1503</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

deficient pms2, ercc1, ku86, ccoi in field defects during progression to colon cancer

В канцерогенеза, &quot;поле дефекта» признана клинически из-за высокой склонности людей, переживших некоторых видов рака для развития других злокачественных новообразований того же типа ткани, часто в близлежащие места. Такие дефекты поля были указаны в рак толстой кишки. Молекулярные нарушения, которые отвечают за полем дефекта в толстой кишке, должны быть обнаружены при высокой частоте в гистологически нормальной ткани вокруг толстой аденокарцинома или окружающих аденомы с передовыми неоплазии (а по дороге на рак толстой кишки), но на низких частотах В слизистой оболочки толстой кишки у пациентов без толстого неоплазии. Использование иммуногистохимии, целые склепы в пределах 10 см с каждой стороны толстой аденокарциномы толстой или расширенный новообразований оказались часто снижение или отсутствие в выражении в течение двух репарации ДНК белков, Pms2 и / или ERCC1. Pms2 является двойной роли белков, активных в восстановлении ДНК несоответствие, а также необходимые в апоптоз клеток с избыточным повреждения ДНК. ERCC1 принимает активное участие в нуклеотидов ДНК репарации. Снижение или отсутствие экспрессии как ERCC1 и Pms2 создаст клеток с обеих увеличить способность к выживанию (апоптоз сопротивление) и повышенный уровень изменчивости. Снижение или отсутствие экспрессии как ERCC1 и Pms2, скорее всего, первым шагом в прогрессии рака толстой кишки. Репарации ДНК гена Ku86 (активные в ДНК негомологичными конце присоединения) и цитохром с оксидазы субъединицы I (участие в апоптозе) каждого из которых сообщалось, снизилась в выражение в слизистой районах, близких к рака толстой кишки. Тем не менее, иммуногистохимического оценки их уровень экспрессии показали только от низкого до скромных частотах склепы испытывают дефицит свое выражение в поле дефекта окружающих рака толстой кишки или окружающих передовых толстой неоплазии. Мы покажем, вот, наш метод оценки склепы для выражения ERCC1, Pms2, Ku86 и CcOI. Показано, что частота целых склепы недостаточно для Pms2 и ERCC1 часто столь же велика, как 70% до 95% в 20 см длиной районах, прилегающих к толстой неоплазии, в то время как частота склепы дефицит Ku86 имеет среднее значение 2%, а частота склепы дефицит CcOI имеет среднее значение 16% в этих областях. Всей толстой кишки составляет 150 см (5 футов) и имеет около 10 миллионов склепов в его слизистой оболочки. Дефект Pms2 и ERCC1 окружающих рака толстой кишки таким образом может включать в себя 1 млн склепов. Именно с дефектными склепе, что рак толстой кишки возникает.

Watch this Scientific Journal Video about Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer at JoVE.com

Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer

Уменьшение / отсутствует выражение Pms2 и / или ERCC1 во всем склепов является частым событием в пределах 10 см с каждой стороны толстой аденокарциномы, вероятно основе полей дефектов с высокой изменчивости и прогрессии рака. Недостаток Ku86 или CcOI гораздо реже в этих полей дефектов.

Дефектные Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI в поле дефектов в процессе прогрессии к раку толстой кишки

In carcinogenesis, the "field defect" is recognized clinically because of the high propensity of survivors of certain cancers to develop other ...

Research

JoVE Journal

Biology

Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects

Имплантация Ferumoxides Маркированный мезенхимальных стволовых клеток человека в Дефекты хряща

The field of tissue engineering integrates the principles of engineering, cell biology and medicine towards the regeneration of specific cells and ...

Peptides from Phage Display Library Modulate Gene Expression in Mesenchymal Cells and Potentiate Osteogenesis in Unicortical Bone Defects

Пептидов из библиотеки Показать Фаг Модуляция экспрессии генов в клетки и мезенхимальные Потенцирует остеогенез в Unicortical костных дефектов

Two novel synthetic peptides accelerate bone formation and can be delivered using a collagen matrix. The aim of this study was to investigate the effects ...

Determining the Contribution of the Energy Systems During Exercise

Определение вклада Energy Systems во время тренировки

One of the most important aspects of the metabolic demand is the relative contribution of the energy systems to the total energy required for a given ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Быстрое Генетический анализ эпителиальных мезенхимальных сигнализации во время регенерации волос

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Живая съемка апоптоза клеток во время акции<em&gt; Drosophila</em&gt; Эмбриогенеза

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Измерение силы при сжатии для оценки функции мышц в личинки данио

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Detection of Alternative Splicing During Epithelial-Mesenchymal Transition

Обнаружение альтернативного сплайсинга Во эпителиальных-мезенхимальных перехода

Alternative splicing plays a critical role in the epithelial-mesenchymal transition (EMT), an essential cellular program that occurs in various ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Временная Отслеживание клеточного цикла прогрессии Использование проточной цитометрии без необходимости синхронизации

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Мышиных холин недостаточным, дополнены Ethionine (CDE) модель хронической травмы печени диета

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Оценка дефекты обструкции мочевыводящих путей Junction Метиленовый синий краситель инъекции

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...