Name: experimental metastasis assay
Uploaded: 2010-08-24T17:10:00
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Dieses Protokoll wurde getestet und zunächst im Labor von Dr. Richard Hynes (MIT) optimiert. Die Finanzierung erfolgt durch die NYSTEM IDEA Award (für LX) und Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (für LX) zur Verfügung gestellt.

1. Probenvorbereitung <ol><li> Wachsen Zellen auf ~ 70% konfluent in ihren spezifischen Medien mit Wachstumsfaktoren oder FBS (zB DMEM mit 10% FBS für MC-1-Zellen). Saugen Sie Medien aus Platte und vorsichtig waschen mehrmals mit 1 x PBS (8 g / l NaCl, 0,2 g / l KCl, 1,15 g / L Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / l KH 2 PO 4, pH 7,3). </li><li> Absaugen PBS und 2 mL von 0,05% Trypsin in Versen (0,014 g / L von Phenolrot und 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schütt...

<ol>
	<li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+in+an+animal+melanoma+model+correlate+with+aggressiveness+of+human+melanoma+metastases.">Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases.</a> Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).</li><li>Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+metastasis+reveals+an+essential+role+for+RhoC.">Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC.</a> Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).</li><li>Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPR56,+an+atypical+G+protein-coupled+receptor,+binds+tissue+transglutaminase,+TG2,+and+inhibits+melanoma+tumor+growth+and+metastasis.">GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).</li><li>Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+melanoma+line+heterogeneous+with+respect+to+metastatic+capacity+in+athymic+nude+mice.">A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).</li><li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multigenic+program+mediating+breast+cancer+metastasis+to+bone.">A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone.</a> Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).</li></ol>

Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Es umfasst vier wesentliche Schritte: Ablösung von Krebszellen aus ihrem primären loci, die Einfahrt in den Verkehr (intravasation), deren Ausfahrt aus dem Verkehr (Extravasation), und das Überleben und Wachstum in einem entfernten Organ. Metastase in der menschlichen gilt als ein langsamer Prozess und oft nach Jahren der Latenz manifestiert. Zur Untersuchung ihrer Progression rechtzeitig wurde die oben relativ schnell Versuchsansatz in immundefizient...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10313-021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30088.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HBSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14175-095</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>S9888</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>6838-04</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Na2 HPO4.7H2O</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>7896-04</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KH2PO4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>7100-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenol red</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P3532</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDTA-Na</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMD Biosciences</td>
<td>4010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypan Blue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15250-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin 2.5%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15090-046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ultrapure</td>
<td>200-CSGP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50 ml Falcon Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>89039-656</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Axygen Scientific</td>
<td>MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Falcon 70&#181;m Cell Strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5ml Falcon Culture Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>60818-576</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemacytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hausser Scientific</td>
<td>15170-208</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>329650</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30 &frac12; gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>305106</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse restrainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Plas Labs Inc.</td>
<td>551-BSRR</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-940</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benchtop Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermoscientific</td>
<td>75003491</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

experimental metastasis assay

Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Um zu verstehen, den Mechanismus der Metastasierung, war eine experimentelle Metastasierung Assay etabliert mit immundefizienten Mäusen. Dieser Artikel umreißt die Verfahren in diesem Test beteiligt, inklusive Probenvorbereitung, intravenöse Injektion, und Kultivieren von Zellen aus der Lunge Metastasen. Kurz gesagt, wurden einer vorher festgelegten Anzahl von menschlichen Krebszellen vorbereitet<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und direkt in den Kreislauf von immundefizienten Mäusen durch ihren Schwanz Venen gespritzt. Eine kleine Anzahl von Zellen überleben die Turbulenzen an den Kreislauf an und wachsen als Metastasen in inneren Organen, wie Lunge. Die injizierten Mäuse sind nach einer gewissen Zeit seziert. Die Verteilung im Gewebe von Metastasen unter einem Binokular bestimmt. Die Anzahl der Metastasen in einem bestimmten Gewebe wird gezählt und es direkt korreliert mit dem metastatischen Fähigkeit der Krebszellen injiziert. Der entstandene Metastasen sind isoliert und kultiviert<em&gt; In-vitro-</em&gt; Als Zell-Linien, die oft zeigen verbesserte metastatischen Fähigkeiten als die Stammlinie, wenn wieder in immundefizienten Mäusen injiziert. Diese hoch metastatischen Derivate werden nützliche Tools zur Identifizierung von Genen oder molekularen Signalwege, die metastatischen Progression zu regulieren.

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Experimental Metastasis Assay

Dieser Artikel beschreibt die Verfahren der experimentellen Metastasierung Assay, mit denen die metastatische Potential von humanen Krebszelllinien zu bestimmen.

Experimentelle Metastase Assay

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients.  To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Quantitative Analyse von Krebs Metastasen mit einem Vogelembryo Modell

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

Forschung

Medizin

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In-vitro-Assay Mesothelzellen Ausverkauf, dass die Modelle der frühen Schritte der Metastasierung Eierstockkrebs

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Models of Bone Metastasis

Models von Knochenmetastasen

Bone metastases are a common occurrence in several malignancies, including breast, prostate, and lung. Once established in bone, tumors are responsible ...

Experimental Human Pneumococcal Carriage

Experimentelle Menschliche Pneumokokken Carriage

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Die<em&gt; In ovo</em&gt; CAM-Assay als Xenograftmodel für Sarkom

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Ein orthotopen Mausmodell der menschlichen Prostatakrebs-Metastasen

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

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Primärtumor und MEF Zellisolation zu Lungenmetastasen Studieren

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...

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Küken-Herz-Invasion Assay zum Testen der Invasivität von Krebszellen und die Aktivität von Potenziell Anti-invasive Verbindungen

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

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Ein &quot;Patient-Like&quot; Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen

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Die Quantifizierung von Intraperitonealtest Ovarian Cancer Metastasis

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...