Name: experimental metastasis assay
Uploaded: 2010-08-24T17:10:00
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Este protocolo fue inicialmente probado y optimizado en el laboratorio del Dr. Richard Hynes (MIT). El financiamiento es provisto por el premio IDEA NYSTEM (a LX) y Ruth L. Kirschstein Premio Nacional de Servicio de Investigación (para LX).

1. Preparación de la muestra <ol><li> Se cultivan las células confluentes a ~ 70% en sus medios de comunicación específicos con factores de crecimiento o FBS (por ejemplo, DMEM con FBS al 10% de MC-1 en las células). Aspirar los medios de comunicación de la placa y lavar suavemente varias veces con 1 x PBS (8 g / l de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3). </li><li> Aspirar PBS y añadir 2 ml de tripsina 0...

<ol>
	<li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+in+an+animal+melanoma+model+correlate+with+aggressiveness+of+human+melanoma+metastases.">Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases.</a> Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).</li><li>Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+metastasis+reveals+an+essential+role+for+RhoC.">Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC.</a> Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).</li><li>Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPR56,+an+atypical+G+protein-coupled+receptor,+binds+tissue+transglutaminase,+TG2,+and+inhibits+melanoma+tumor+growth+and+metastasis.">GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).</li><li>Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+melanoma+line+heterogeneous+with+respect+to+metastatic+capacity+in+athymic+nude+mice.">A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).</li><li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multigenic+program+mediating+breast+cancer+metastasis+to+bone.">A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone.</a> Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).</li></ol>

La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Se trata de cuatro pasos principales: el desprendimiento de las células cancerosas de sus lugares principales, su entrada en circulación (intravasation), su salida de la circulación (extravasación), y la supervivencia y el crecimiento en un órgano distante. Metástasis en humanos se considera un proceso lento y muchas veces se manifiesta después de varios años de latencia. Para el estudio de su progresión en el momento oportuno, el ensayo a...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10313-021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30088.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HBSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14175-095</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>S9888</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>6838-04</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Na2 HPO4.7H2O</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>7896-04</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KH2PO4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>7100-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenol red</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P3532</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDTA-Na</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMD Biosciences</td>
<td>4010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypan Blue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15250-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin 2.5%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15090-046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ultrapure</td>
<td>200-CSGP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50 ml Falcon Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>89039-656</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Axygen Scientific</td>
<td>MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Falcon 70&#181;m Cell Strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5ml Falcon Culture Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>60818-576</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemacytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hausser Scientific</td>
<td>15170-208</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>329650</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30 &frac12; gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>305106</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse restrainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Plas Labs Inc.</td>
<td>551-BSRR</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-940</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benchtop Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermoscientific</td>
<td>75003491</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

experimental metastasis assay

La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Para entender el mecanismo de la metástasis, un ensayo de metástasis experimental se estableció el uso de ratones inmunodeficientes. Este artículo delinea los procedimientos involucrados en este ensayo, incluyendo la preparación de muestras, la inyección intravenosa, y el cultivo de células de metástasis pulmonares. En pocas palabras, un número determinado de células de cáncer humano se prepararon<em&gt; In vitro</em&gt; Y se inyecta directamente en la circulación de ratones inmunodeficientes por las venas de la cola. Un pequeño número de células sobrevivir a la turbulencia en la circulación y crecen como las metástasis en los órganos internos, como el pulmón. Los ratones inyectados se diseccionan después de un período determinado. La distribución en los tejidos de las metástasis se determina bajo un microscopio de disección. El número de metástasis en un tejido específico se cuenta y se correlaciona directamente con la capacidad metastásica de las células cancerosas inyectadas. La metástasis surgido son aisladas y cultivadas<em&gt; In vitro</em&gt; Como líneas celulares, que a menudo muestran una mayor capacidad metastásica de la línea de los padres cuando se inyecta de nuevo en ratones inmunodeficientes. Estos derivados altamente metastásico convertirse en herramientas útiles para la identificación de genes o de las vías moleculares que regulan la progresión metastásica.

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Experimental Metastasis Assay

En este artículo se describen los procedimientos de ensayo de metástasis experimental que se utiliza para determinar el potencial metastásico de líneas celulares de cáncer humano.

Ensayo experimental de metástasis

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients.  To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Análisis cuantitativo de la metástasis del cáncer utilizando un modelo de embrión aviar

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

Investigación

Medicina

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

Ensayo in vitro Liquidación mesoteliales que modela los pasos iniciales de la metástasis del cáncer ovárico

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Models of Bone Metastasis

Los modelos de metástasis en los huesos

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Experimental Human Pneumococcal Carriage

Carriage Experimental neumocócica Humanos

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

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The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

La<em&gt; En ovo</em&gt; CAM-ensayo como un Xenograftmodel para el sarcoma

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