Name: immunocytochemical analysis of human pluripotent stem cells using a self-made cytospin apparatus
Uploaded: 2010-04-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemical Analysis of Human Pluripotent Stem Cells using a Self-Made Cytospin Apparatus at JoVE.com

<p class="jove_content"> इस काम के लिए आंशिक वित्त पोषण 0744556 NSF कैरियर (राव) और VCU HHMI विज्ञान शिक्षा और अनुसंधान कार्यक्रम (Pascual) के माध्यम से एक छात्रवृत्ति के द्वारा प्रदान किया गया. </p>

<p class="jove_title"> भाग 1: सस्पेंशन Immunocytochemical धुंधला </p><ol><li> कक्ष एक एकल कक्ष निलंबन में harvested रहे हैं. </li><li> कोशिकाओं तो 1.5 2ml microcentrifuge ट्यूबों में स्थानांतरित कर रहे हैं और 4 मिनट के लिए 200g पर centrifuged. </li><li> कक्ष से बाहर सतह पर तैरनेवाला aspirating से धो...

<ol>
	<li>Rao, R. R., Johnson, A. V., Stice, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+markers+in+human+embryonic+stem+cells.">Cell surface markers in human embryonic stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in Mol. Bio. - Stem Cell Assays</em>. <b>407</b>, 51-61 (2007).</li><li>Sisino, G., Bellavia, D., Corallo, M., Geraci, F., Barbieri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+homemade+cytospin+apparatus.">A homemade cytospin apparatus.</a> <em style='font-style: italic'>Anal. Biochem</em>. <b>359</b>, 283-284 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content"> हमारी प्रयोगशाला के प्रयोजनों के लिए, माउस भ्रूणीय fibroblasts (MEFs) पर हो स्टेम सेल संस्कृतियों की एक 35 मिमी पकवान cytospin तंत्र के साथ उपयोग के लिए immunocytochemical धुंधला प्रक्रिया के लिए आवंटित किया है. कोशिकाओं तो passaging एंज?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Lab Tek Permanox Chamber Slide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher Scientific</td>
<td>117437</td>
<td>Material for re-used plastic slides</td>
</tr>
<tr>
<td>Superfrost/Plus Microscope Slides Precleaned</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-550-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.1-10&mu;L Filter Tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>1121-3810</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Cover Glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>120542-B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cytoseal 280</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Richard-Allan Scientific</td>
<td>8311-4</td>
<td>Mounting Medium</td>
</tr>
<tr>
<td>DPBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>14190</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Normal Goat Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10000C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse Anti-SSEA-4 Monoclonal Antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore/Chemicon</td>
<td>MAB4304</td>
<td>Primary Antibody for SSEA-4 staining</td>
</tr>
<tr>
<td>Rat Anti-SSEA-3 Monoclonal Antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore/Chemicon</td>
<td>MAB4303</td>
<td>Primary Antibody for SSEA-3 staining</td>
</tr>
<tr>
<td>Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/ Molecular Probes</td>
<td>A11029</td>
<td>Secondary Antibody for SSEA-4 staining</td>
</tr>
<tr>
<td>Alexa Fluor 488 Labeled Goat Anti-Rat IgG </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen/ Molecular Probes</td>
<td>A11006</td>
<td>Secondary Antibody for SSEA-3 staining</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI, Dihydrochloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CalBioChem</td>
<td>268298</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

immunocytochemical analysis of human pluripotent stem cells using a self-made cytospin apparatus

<p class="jove_content">मानव pluripotent स्टेम कोशिकाओं (hPSCs) है कि मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESCs) और मानव प्रेरित pluripotent स्टेम कोशिकाओं (hiPSCs) शामिल रोमांचक उनके असीम आत्म नवीकरण क्षमता और उनके कई प्रकार की कोशिकाओं में अंतर करने की क्षमता के कारण सेल स्रोत हैं. hPSCs के pluripotent राज्य आमतौर पर qPCR, immunocytochemistry जैसे तकनीकों द्वारा मूल्यांकन किया है, और अन्य द्वारा<em&gt; इन विट्रो में</em&gt; और<em&gt; Vivo में</em&gt; कई प्रकार की कोशिकाओं में भेदभाव रणनीतियों. इनमें immunocytochemical तकनीक hPSCs के undifferentiated राज्य उम्मीदवार intracellular और सेल सतह बायोमार्कर के विश्लेषण पर आधारित नियमित लक्षण वर्णन के लिए विकसित किया गया है. तथ्य यह है कि hPSCs बढ़ने कालोनियों समस्याओं के रूप में एक नियमित आधार पर व्यक्तिगत स्तर पर सेल इन मार्करों की अभिव्यक्ति बढ़ाता में उठता को देखते हुए. प्रवाह cytometry विश्लेषण इस मुद्दे के समाधान लेकिन सेल नंबर की आवश्यकता है और अभिकर्मकों कि आम तौर पर hPSC संस्कृतियों की दिनचर्या गुणवत्ता नियंत्रण मूल्यांकन के लिए अनुकूल नहीं हैं का उपयोग सेवा. इस प्रकार, मार्कर के मूल्यांकन के लिए संरक्षित अखंडता के साथ monolayer सेल के नमूने बनाने के व्यावहारिक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मतलब के विकास स्टेम सेल अनुसंधान में कई फायदे हैं. यह बहुत immunocytochemical विश्लेषण लाभ क्योंकि monolayer से व्यक्तिगत कोशिकाओं को आसानी से हो सकता है और देखा जा विशिष्ट मार्करों की अभिव्यक्ति के लिए मात्रा निर्धारित है. इस लक्ष्य की दिशा में, एक स्वयं बनाया cytospin तंत्र का निर्माण किया गया था और immunocytochemical धुंधला के साथ उपयोग के लिए अनुकूलित. इस प्रोटोकॉल के प्रयोजन के लिए एक संस्करण BG01 स्टेम सेल लाइन में दो सेल सतह मार्कर (SSEA3/SSEA4) अभिव्यक्ति विश्लेषण किया गया.</p>

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Immunocytochemical Analysis of Human Pluripotent Stem Cells using a Self-Made Cytospin Apparatus

<p class="jove_content">सस्पेंशन मानव pluripotent स्टेम कोशिकाओं के immunocytochemical धुंधला (hPSCs) (SSEA-3/SSEA-4) सेल सतह मार्कर के लिए एक स्वयं बनाया cytospin प्रेक्षण और मात्रा का ठहराव के लिए कक्षों की एक monolayer बनाने तंत्र का उपयोग के आधार पर हासिल की थी.</p>

मानव pluripotent स्टेम सेल के Immunocytochemical विश्लेषण एक सेल्फ मेड Cytospin उपकरण का उपयोग कर

Human pluripotent stem cells (hPSCs) that include human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are exciting cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Pluripotent Stem Cells by using Cryosections of Embryoid Bodies

Pluripotent स्टेम सेल की embryoid निकायों के Cryosections का उपयोग करके विश्लेषण

Embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of blastocyst-stage early mammalian embryos 1. A crucial stage in the ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल Transfecting और Nucleofecting

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

लघु अणु प्रेरण के साथ pluripotent मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से मानव कार्डिएक व्यापारियों और cardiomyocytes के कुशल व्युत्पत्ति

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (IPSCs) GFP साथ रेट्रोवायरल वैक्टर का उपयोग में दैहिक कोशिकाओं reprogramming

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

मानव परिधीय रक्त से प्रेरित pluripotent स्टेम सेल का प्रयोग STEMCCA lentiviral वेक्टर पीढ़ी

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, ...

Rapid and Efficient Generation of Neurons from Human Pluripotent Stem Cells in a Multititre Plate Format

मानव pluripotent स्टेम सेल से एक Multititre प्लेट प्रारूप में न्यूरॉन्स की तेजी से और कुशल जनरेशन

Existing protocols for the generation of neurons from human pluripotent stem cells (hPSCs) are often tedious in that they are  multistep procedures ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव cardiomyocytes की पीढ़ी: फीडर से मुक्त मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से एक भेदभाव प्रोटोकॉल

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mesenchymal संक्रमण के लिए प्रेरण और उपकला का विश्लेषण

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

सेंडाइ वायरस के साथ मानव दैहिक कोशिकाओं से कुशल उत्पादन मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Alternative Cultures for Human Pluripotent Stem Cell Production, Maintenance, and Genetic Analysis

मानव pluripotent के लिए वैकल्पिक संस्कृतियों सेल उत्पादन, रखरखाव, और जेनेटिक विश्लेषण स्टेम

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and ...