Name: floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression
Uploaded: 2010-06-11T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃŽÂ²-glucuronidase Reporter Gene Expression at JoVE.com

Wij danken Chunxin Wang voor de bouw van pTSO2:: GUS en voor de foto&#39;s in figuur 1, Detlef Weigel voor het delen van de GUS-waterdicht protocol, Paja Sijacic, en Courtney Hollender voor nuttige commentaar. Onderzoek in het laboratorium Z. L s wordt ondersteund door de Amerikaanse National Science Foundation (IOB0616096 en MCB0744752). ZL wordt gedeeltelijk ondersteund door de Universiteit van Maryland Agricultural Experiment Station.

I. Bloemen-dip transformatie van Arabidopsis thaliana <ol><li> Ongeveer een maand voorafgaand aan de transformatie, zaaien Arabidopsis zaden op 4-8 potten (5 inch vierkante potten) met circa 10-15 planten per pot. Voor installaties met een normale vruchtbaarheid, zal vier potten van planten per plasmideconstruct voldoende zijn. Als men aan mutant Arabidopsis te transformeren met een verminderde vruchtbaarheid, toename van het aantal potten dienovereenkomstig. </li><li> De planten worden gete...

<ol>
	<li>Clough, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+agrobacterium-mediated+germ+line+transformation.">Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation.</a> Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).</li><li>Wang, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ribonucleotide+reductases+are+critical+for+cell+cycle+progression,+DNA+damage+repair,+and+plant+development.">Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development.</a> Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).</li></ol>

De efficiëntie van de transformatie wordt bepaald door veel verschillende factoren, die hierna worden besproken: <ol><li> De gezondheid van de planten en hun leeftijd zijn van primair belang. Ongeveer een maand oude planten produceren van tal van onvolwassen bloemen knoppen zijn ideaal. Knippen uit primaire scheuten naar secundair scheutvorming 3-4 dagen aan te moedigen voor de transformatie zal toenemen transformatie-efficiëntie. Oudere planten zullen aanleiding geven tot transformanten, maar tegen een lager tari...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>6-benzyladenine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>852430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silwet-77</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Crompton Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Toxic, wear gloves</td>
</tr>
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal medium (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5519</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gamborg's vitamin solution 1000X</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-glucuronide cyclohexamine salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth</td>
<td>B-7300</td>
<td>Toxic, light sensitive keep in the dark</td>
</tr>
<tr>
<td>Micropore 3M Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19027761</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression

De mogelijkheid om vreemde genen te introduceren in een organisme is de basis voor de moderne biologie en biotechnologie. In het model bloeiende plant<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;, De bloemen-dip transformatie methode<sup&gt; 1-2</sup&gt; Heeft vervangen alle voorgaande methoden vanwege zijn eenvoud, efficiëntie en lage kosten. In het bijzonder, scheuten van jonge bloeiende<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Planten worden gedompeld in een oplossing van<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; Uitvoering van specifieke plasmide constructen. Na het dompelen worden de planten weer een normale groei en zaaigoed, een klein percentage van die getransformeerd met het vreemde gen en kan worden geselecteerd voor medium met antibiotica. Deze bloemen-dip-methode aanzienlijk vergemakkelijkt<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Onderzoek en in hoge mate bijgedragen aan ons begrip van de plant genfunctie. In deze studie hebben we gebruik maken van de bloemen-dip methode om een ​​reportergen te transformeren,<em&gt; Β-glucuronidase (GUS)</em&gt;, Onder de controle van<em&gt; TSO2</em&gt; Promotor.<em&gt; TSO2</em&gt;, Dat codeert voor het ribonucleotidereductasesysteem (RNR) kleine subeenheid<sup&gt; 3</sup&gt;, Is een celcyclus gereguleerd gen dat essentieel is voor dNDP biosynthese in de S-fase van de celcyclus. Onderzoek van<em&gt; GUS</em&gt; Expressie in transgene<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Zaailingen toont aan dat<em&gt; TSO2</em&gt; Wordt uitgedrukt in actief delende weefsels. De gerapporteerde experimentele methode en materialen kunnen gemakkelijk worden aangepast, niet alleen voor onderzoek, maar ook voor het onderwijs op de middelbare school en universiteit niveaus.

Watch this Scientific Journal Video about Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃŽÂ²-glucuronidase Reporter Gene Expression at JoVE.com

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase Reporter Gene Expression

Dit artikel illustreert de bloemen-dip methode van<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt;-Gemedieerde transformatie van<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;. Door de introductie van een cel-cyclus gereguleerde promotor-reporter,<em&gt; PTSO2:: β-glucuronidase (GUS)</em&gt;, In<em&gt; Arabidopsis</em&gt;, We zien hoe een verslaggever GUS expressie in transgene zaailingen detecteert.

Bloemen-dip Transformatie van Arabidopsis thaliana Om te onderzoeken PTSO2:: β-glucuronidase Reporter Gene Expression

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Research

JoVE Journal

Biology

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Met behulp van de Gene Puiser MXcell Elektroporatie systeem om primaire cellen transfecteren met een hoog rendement

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Met behulp van een geautomatiseerde cel Counter aan Gene Expression Studies Vereenvoudigen: siRNA Knockdown van IL-4 Afhankelijk van genexpressie in cellen Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Onderzoeken Tissue-en orgel-specifieke fytochroom Reacties met behulp van FACS-assisted Cell-type-specifieke expressie profilering in Arabidopsis thaliana</em

Light mediates an array of developmental and adaptive processes throughout the life cycle of a plant. Plants utilize light-absorbing molecules called ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro reconstitutie van de Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Histochemische kleuring van<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Secundaire celwand Elements

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analyse van Global RNA synthese in de Single Cell Level volgende Hypoxie

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Floral-Dip Transformation of Flax (Linum usitatissimum) to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Floral-Dip Transformation of Flax Linum usitatissimum to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Bloemen-Dip Transformatie van vlas (<em&gt; Linum usitatissimum</em&gt;) Om Transgene progenies Genereer met een High Transformation Rate

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Visualiseren Stromule Frequency met fluorescentiemicroscopie

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Spatiotemporal Investigation of ERL1 Dynamics via Confocal Imaging

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells (Video) | JoVE 

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...