Name: floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression
Uploaded: 2010-06-11T17:00:00
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Ringraziamo Chunxin Wang per la costruzione di pTSO2:: GUS e per le foto in figura 1, Detlef Weigel per la condivisione del GUS-infallibile protocollo, Paja Sijacic, e Courtney Hollender per gli utili commenti. La ricerca in laboratorio, Z. L s è supportato dal US National Science Foundation (IOB0616096 e MCB0744752). ZL è parzialmente supportata dalla University of Maryland Stazione esperimento agricola.

I. floreale-dip trasformazione di Arabidopsis thaliana <ol><li> Circa 1 mese prima trasformazione, seminare i semi di Arabidopsis sul 4-8 pentole (5 vasi pollice quadrato), con circa 10-15 piante per vaso. Per gli impianti con la fertilità normale, 4 vasi di piante per costruire plasmide sarà sufficiente. Se uno ha a trasformare Arabidopsis mutante con riduzione della fertilità, aumentare il numero di vasi di conseguenza. </li><li> Le piante sono coltivate in condizioni standard (16 ore d...

<ol>
	<li>Clough, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+agrobacterium-mediated+germ+line+transformation.">Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation.</a> Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).</li><li>Wang, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ribonucleotide+reductases+are+critical+for+cell+cycle+progression,+DNA+damage+repair,+and+plant+development.">Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development.</a> Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).</li></ol>

L&#39;efficienza di trasformazione è determinato da molti fattori diversi, che sono discussi di seguito: <ol><li> La salute delle piante e la loro età sono di primaria importanza. Circa un mese impianti di produzione di numerose gemme floreali immaturi sono l&#39;ideale. Taglio fuori spara primario di incoraggiare secondaria giornate di formazione sparare 3-4 prima della trasformazione aumenterà l&#39;efficienza della trasformazione. Vecchi impianti darà origine a trasformanti ma ad un tasso inferiore. </li><li>...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>6-benzyladenine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>852430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silwet-77</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Crompton Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Toxic, wear gloves</td>
</tr>
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal medium (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5519</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gamborg's vitamin solution 1000X</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-glucuronide cyclohexamine salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth</td>
<td>B-7300</td>
<td>Toxic, light sensitive keep in the dark</td>
</tr>
<tr>
<td>Micropore 3M Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19027761</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression

La possibilità di introdurre geni estranei in un organismo è il fondamento della biologia moderna e le biotecnologie. Nella pianta fiorita modello<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;, I fiori-dip trasformazione del metodo<sup&gt; 1-2</sup&gt; Ha sostituito tutti i metodi precedenti per la sua semplicità, efficienza e basso costo. In particolare, i germogli di fioritura giovani<em&gt; Arabidopsis</emPiante&gt; sono immersi in una soluzione di<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; Trasporto specifico costruisce plasmide. Dopo l&#39;immersione, le piante vengono restituiti alla crescita normale e semi di resa, una piccola percentuale dei quali sono trasformate con il gene estraneo e possono essere selezionati per il supporto contenente antibiotici. Questo floreali-dip metodo significativamente facilitato<em&gt; Arabidopsis</emDi ricerca&gt; e ha contribuito notevolmente alla comprensione della funzione dell&#39;impianto gene. In questo studio, si usa il floreali-dip metodo per trasformare un gene reporter,<em&gt; Β-glucuronidasi (GUS)</em&gt;, Sotto il controllo di<em&gt; TSO2</em&gt; Promotore.<em&gt; TSO2</em&gt;, Che codifica per la ribonucleotide reduttasi (RNR) subunità piccola<sup&gt; 3</sup&gt;, È un gene del ciclo cellulare regolata essenziale per la biosintesi dNDP nella fase S del ciclo cellulare. Esame della<em&gt; GUS</emEspressione&gt; in transgenico<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Piantine mostra che<em&gt; TSO2</em&gt; È espressa in modo attivo divisione tessuti. Il metodo riportato sperimentale e materiali può essere facilmente adattato non solo per la ricerca ma anche di istruzione alle scuole superiori e livelli di college.

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Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase Reporter Gene Expression

Questo articolo illustra la floreali-dip metodo di<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt;-Mediata trasformazione del<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;. Con l&#39;introduzione di un ciclo cellulare regolata promotore-reporter,<em&gt; PTSO2:: β-glucuronidasi (GUS)</em&gt;, In<em&gt; Arabidopsis</em&gt;, Ci illustra come si rileva giornalista espressione GUS in piantine transgeniche.

Floreale-dip Trasformazione Arabidopsis thaliana Per esaminare PTSO2:: β-glucuronidasi Reporter espressione genica

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Research

JoVE Journal

Biology

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

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