Name: floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression
Uploaded: 2010-06-11T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃŽÂ²-glucuronidase Reporter Gene Expression at JoVE.com

Agradecemos a Chunxin Wang para a construção de pTSO2:: GUS e para fotos na Figura 1, Detlef Weigel para compartilhar o protocolo GUS-infalível, Paja Sijacic, e Courtney Hollender para comentários úteis. Pesquisa em laboratório Z. L s é apoiado pela National Science Foundation EUA (IOB0616096 e MCB0744752). ZL é parcialmente financiado pela Universidade de Maryland Estação Experimental Agrícola.

I. Floral-dip transformação de Arabidopsis thaliana <ol><li> Aproximadamente 1 mês antes da transformação, semear Arabidopsis para 4-8 vasos (5 polegadas potes quadrados), com cerca de 10-15 plantas por vaso. Para plantas com fertilidade normal, 4 potes de plantas por construir plasmídeo será suficiente. Se alguém tem de transformar Arabidopsis mutantes com a fertilidade reduzida, aumento do número de potes em conformidade. </li><li> As plantas são cultivadas em condições normais...

<ol>
	<li>Clough, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+agrobacterium-mediated+germ+line+transformation.">Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation.</a> Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).</li><li>Wang, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ribonucleotide+reductases+are+critical+for+cell+cycle+progression,+DNA+damage+repair,+and+plant+development.">Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development.</a> Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).</li></ol>

A eficiência de transformação é determinada por muitos fatores diferentes, que são discutidos abaixo: <ol><li> A saúde das plantas e sua idade é de importância primordial. Cerca de um mês de idade plantas produzindo inúmeros botões florais imaturos são ideais. Aparando os galhos primária para encorajar a formação secundária dia 04/03 tiro antes da transformação irá aumentar a eficiência de transformação. Plantas mais velhas dará origem a transformantes, mas a uma taxa inferior. </li><li> Ferti...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>6-benzyladenine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>852430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silwet-77</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Crompton Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Toxic, wear gloves</td>
</tr>
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal medium (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5519</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gamborg's vitamin solution 1000X</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-glucuronide cyclohexamine salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth</td>
<td>B-7300</td>
<td>Toxic, light sensitive keep in the dark</td>
</tr>
<tr>
<td>Micropore 3M Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19027761</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression

A capacidade de introduzir genes estranhos em um organismo é a base para a biologia moderna e biotecnologia. Na planta de floração modelo<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;, O floral-dip método de transformação<sup&gt; 02/01</sup&gt; Substituiu todos os métodos anteriores devido à sua simplicidade, eficiência e baixo custo. Especificamente, brotos de flores jovens<em&gt; Arabidopsis</emPlantas&gt; são mergulhados em uma solução de<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; Carregando construções específicas de plasmídeo. Após imersão, as plantas são devolvidos para o crescimento normal e sementes de rendimento, uma pequena porcentagem dos quais são transformados com o gene estranho e pode ser selecionado para em meio contendo antibióticos. Este método floral-dip significativamente facilitado<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Pesquisa e contribuíram muito para nossa compreensão da função dos genes da planta. Neste estudo, usamos o floral-dip método para transformar um gene repórter,<em&gt; Β-glucuronidase (GUS)</em&gt;, Sob o controle de<em&gt; TSO2</em&gt; Promotor.<em&gt; TSO2</em&gt;, Codificação para a ribonucleotídeo redutase (RNR) subunidade pequena<sup&gt; 3</sup&gt;, É um gene do ciclo celular regulados essencial para a biossíntese dNDP na fase S do ciclo celular. Exame de<em&gt; GUS</em&gt; Expressão em transgênicos<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Mudas mostra que<em&gt; TSO2</em&gt; É expressa em divisão ativa tecidos. O método relatado experimental e materiais podem ser facilmente adaptadas não só para a investigação, mas também para a educação na escola e na faculdade.

Watch this Scientific Journal Video about Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃŽÂ²-glucuronidase Reporter Gene Expression at JoVE.com

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase Reporter Gene Expression

Este artigo ilustra o floral-dip método de<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; Mediada por transformação de<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;. Pela introdução de um ciclo celular regulados promotor-repórter,<em&gt; PTSO2:: β-glucuronidase (GUS)</em&gt;, Em<em&gt; Arabidopsis</em&gt;, Que ilustra como um detecta GUS expressão repórter em mudas transgênicas.

Floral-dip Transformação de Arabidopsis thaliana Examine a PTSO2:: β-glucuronidase Expressão Gênica Reporter

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Research

JoVE Journal

Biology

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Elaboração de culturas de células primárias hematopoéticas de medula óssea de camundongos para Eletroporação

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Biologia

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Usando o Sistema de Eletroporação Gene Pulser MXcell para transfectar pilhas com Alta Eficiência

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Usando um contador de células automatizadas para simplificar Estudos da Expressão Gênica: Knockdown siRNA de Expressão IL-4 Gene Dependente em células NAMALWA

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Investigando Tecido e órgãos específicos Responses Fitocromo usando FACS assistida Célula tipo Profiling expressão específica no Arabidopsis thaliana</em

Light mediates an array of developmental and adaptive processes throughout the life cycle of a plant. Plants utilize light-absorbing molecules called ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Na reconstituição in vitro da atividade T. Telomerase castaneum

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Coloração histoquímica de<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Celular Secundária parede Elements

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Análise da Global RNA Síntese no nível da célula única seguinte hipóxia

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Floral-Dip Transformation of Flax (Linum usitatissimum) to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Floral-Dip Transformation of Flax Linum usitatissimum to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Floral-Dip Transformação de linho (<em&gt; Linum usitatissimum</em&gt;) Para gerar Transgênicos Progênies com uma alta taxa de Transformação

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Visualizando Frequency Stromule com microscopia de fluorescência

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Spatiotemporal Investigation of ERL1 Dynamics via Confocal Imaging

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells (Video) | JoVE 

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...