Name: floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression
Uploaded: 2010-06-11T17:00:00
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Damos las gracias a Chunxin Wang para la construcción de pTSO2:: GUS y las fotos en la Figura 1, Detlef Weigel para compartir el protocolo de GUS-a prueba de tontos, Sijacic Paja y Hollender Courtney por sus valiosos comentarios. Investigación en el laboratorio Z. L s es apoyado por los EE.UU. National Science Foundation (IOB0616096 y MCB0744752). ZL es parcialmente financiado por la Universidad de Maryland Estación Experimental Agrícola.

I. floral inmersión en la transformación de Arabidopsis thaliana <ol><li> Aproximadamente un mes antes de la transformación, sembrar las semillas de Arabidopsis en 4-8 botes (5 ollas pulgada cuadrada), con aproximadamente 10-15 plantas por maceta. Para las plantas con fertilidad normal, 4 macetas de plantas por construir el plásmido será suficiente. Si uno tiene que transformar Arabidopsis mutante con reducción de la fertilidad, aumentar el número de macetas en consecuencia. </li><li>...

<ol>
	<li>Clough, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+agrobacterium-mediated+germ+line+transformation.">Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation.</a> Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).</li><li>Wang, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ribonucleotide+reductases+are+critical+for+cell+cycle+progression,+DNA+damage+repair,+and+plant+development.">Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development.</a> Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).</li></ol>

La eficiencia de transformación está determinada por muchos factores diferentes, que se analizan a continuación: <ol><li> La salud de las plantas y su edad son de vital importancia. Aproximadamente un mes las plantas produciendo numerosos botones florales inmaduros son ideales. Recorte de los brotes principales para fomentar la formación secundaria días 3-4 disparar antes de la transformación se incrementará la eficiencia de transformación. Las plantas más viejas dará lugar a transformantes, pero a un ritm...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
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		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>6-benzyladenine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>852430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silwet-77</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Crompton Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Toxic, wear gloves</td>
</tr>
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal medium (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5519</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gamborg's vitamin solution 1000X</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-glucuronide cyclohexamine salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth</td>
<td>B-7300</td>
<td>Toxic, light sensitive keep in the dark</td>
</tr>
<tr>
<td>Micropore 3M Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19027761</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression

La capacidad de introducir genes extraños en un organismo es la base de la biología moderna y la biotecnología. En el modelo de planta de flores<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;, El floral dip transformación del método<sup&gt; 2.1</sup&gt; Ha sustituido a todos los métodos anteriores, debido a su simplicidad, eficiencia y bajo costo. En concreto, los brotes jóvenes de la floración<em&gt; Arabidopsis</emPlantas&gt; se sumergen en una solución de<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; La realización específica construcciones de plásmidos. Después de la inmersión, las plantas se volvió a su normal crecimiento y rendimiento de semillas, un pequeño porcentaje de los cuales son transformados con el gen extraño y pueden ser seleccionados para el medio con antibióticos. Este método de inmersión floral facilitado considerablemente<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Investigación y contribuyó enormemente a nuestra comprensión de la función de genes de plantas. En este estudio, utilizamos el método de inmersión floral para transformar un gen reportero,<em&gt; Β-glucuronidasa (GUS)</em&gt;, Bajo el control de<em&gt; TSO2</em&gt; Promotor.<em&gt; TSO2</em&gt;, Que codifica para la ribonucleótido reductasa (RNR) subunidad pequeña<sup&gt; 3</sup&gt;, Es un gen ciclo celular está regulado esencial para la biosíntesis de dNDP en la fase S del ciclo celular. El examen de<em&gt; GUS</em&gt; Expresión en plantas transgénicas<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Plántulas muestra que<em&gt; TSO2</em&gt; Se expresa en los tejidos se dividen activamente. El método experimental reportado y los materiales pueden ser fácilmente adaptados no sólo a la investigación sino también para la educación en la escuela secundaria y superior.

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Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase Reporter Gene Expression

En este artículo se ilustra el método de inmersión floral de<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; La transformación mediada de<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;. Mediante la introducción de un ciclo celular regulados promotor-reportero,<em&gt; PTSO2:: β-glucuronidasa (GUS)</em&gt;, En<em&gt; Arabidopsis</em&gt;, Que ilustra cómo se detecta la expresión de GUS en plantas transgénicas reportero.

Floral dip transformación de la Arabidopsis thaliana Para el Examen de PTSO2:: β-glucuronidasa Reporter Expresión Génica

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Research

JoVE Journal

Biology

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

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