Name: floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression
Uploaded: 2010-06-11T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃŽÂ²-glucuronidase Reporter Gene Expression at JoVE.com

Vi tackar Chunxin Wang för att bygga pTSO2:: GUS och för foton i figur 1, Detlef Weigel för att dela GUS-idiotsäkert protokoll, Paja Sijacic och Courtney Hollender för hjälpsamma kommentarer. Forskning i Z. L laboratorium stöds av US National Science Foundation (IOB0616096 och MCB0744752). ZL är delvis stöds av University of Maryland Agricultural Experiment Station.

I. blom-dip omvandlingen av Arabidopsis thaliana <ol><li> Ungefär en månad före omvandling, sugga Arabidopsis frön på 4 till 8 krukor (5 cm fyrkantiga krukor) med ca 10-15 plantor per pott. För anläggningar med normal fertilitet, kommer 4 krukor med plantor per plasmid konstruktion vara tillräckligt. Om man har att förändra muterade Arabidopsis med nedsatt fertilitet, öka antalet krukor därefter. </li><li> Plantorna odlas under normala förhållanden (16 tim ljus och 8 timmar mö...

<ol>
	<li>Clough, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+agrobacterium-mediated+germ+line+transformation.">Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation.</a> Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).</li><li>Wang, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ribonucleotide+reductases+are+critical+for+cell+cycle+progression,+DNA+damage+repair,+and+plant+development.">Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development.</a> Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).</li></ol>

Effektiviteten i omvandlingen bestäms av många olika faktorer, som diskuteras nedan: <ol><li> Hälsan hos växter och deras ålder är av största vikt. Ungefär en månad gamla anläggningar som producerar många omogna blommiga knoppar är idealiska. Trimning av primära skott för att stimulera sekundära skjuta bildandet 3-4 dagar innan förvandlingen kommer att öka omvandlingseffektiviteten. Äldre anläggningar kommer att ge upphov till transformants men i lägre takt. </li><li> Fertilitet av anläggningarn...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>6-benzyladenine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>852430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silwet-77</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Crompton Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Toxic, wear gloves</td>
</tr>
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal medium (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5519</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gamborg's vitamin solution 1000X</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-glucuronide cyclohexamine salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth</td>
<td>B-7300</td>
<td>Toxic, light sensitive keep in the dark</td>
</tr>
<tr>
<td>Micropore 3M Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>19027761</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

floral-dip transformation of arabidopsis thaliana to examine ptso2::&beta;-glucuronidase reporter gene expression

Den förmåga att introducera främmande gener i en organism är grunden för modern biologi och bioteknik. I modellen blommande växt<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;, Den blommiga-dip omvandling metod<sup&gt; 1-2</sup&gt; Har ersatt alla tidigare metoder grund av dess enkelhet, effektivitet och låg kostnad. Specifikt skott av unga blommande<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Växter doppas i en lösning av<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt; Bär specifika plasmid konstruktioner. Efter doppa, är de växter som återgått till normal tillväxt och frön avkastning, en liten del av som omvandlas med främmande gen och kan väljas för på ett medium som innehåller antibiotika. Denna blommiga-dip-metoden avsevärt underlättas<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Forskning och hög grad bidragit till vår förståelse av växt geners funktion. I denna studie använder vi blommor-dip metoden att omvandla en reporter gen,<em&gt; Β-glukuronidas (GUS)</em&gt;, Under kontroll av<em&gt; TSO2</em&gt; Promotor.<em&gt; TSO2</em&gt;, Som kodar för ribonukleotidreduktas (RNR) liten subenhet<sup&gt; 3</sup&gt; Är en cellcykeln regleras gen viktigt för dNDP biosyntesen i S-fasen av cellcykeln. Granskning av<em&gt; GUS</em&gt; Uttryck i transgena<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Plantor visar att<em&gt; TSO2</em&gt; Uttrycks i aktivt delande vävnad. Det redovisade experimentella metod och material kan enkelt anpassas inte bara för forskningen utan också för utbildning på gymnasiet och nivåer college.

Watch this Scientific Journal Video about Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃŽÂ²-glucuronidase Reporter Gene Expression at JoVE.com

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase Reporter Gene Expression

Den här artikeln illustrerar den blommiga-dip metoden<em&gt; Agrobacterium tumefaciens</em&gt;-Medierad omvandling av<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt;. Genom att införa en cell-cykel reglerade promotor-reporter,<em&gt; PTSO2:: β-glukuronidas (GUS)</em&gt;, Till<em&gt; Arabidopsis</em&gt;, Visar vi hur en upptäcker GUS reporter uttryck i transgena plantor.

Blom-dip Omvandling av Arabidopsis thaliana För att undersöka PTSO2:: β-glukuronidasaktivitet Reporter Gene Expression

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Research

JoVE Journal

Biology

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Beredningen av primära hematopoietisk cell kulturer från Murine Bone Marrow för elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Använda Gene Pulser MXcell elektroporation System till transfektera primärceller med hög verkningsgrad

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Hjälp av ett automatiserat celltalsräknare att förenkla Studier Gene Expression: siRNA Knockdown av IL-4 beroende genuttryck i Namalwa Cells

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Undersöka Tissue-och orgel-specifika Phytochrome Svar med FACS-assisterad Cell-typspecifika expression profiling i Arabidopsis thaliana</em

Light mediates an array of developmental and adaptive processes throughout the life cycle of a plant. Plants utilize light-absorbing molecules called ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Beredning av Active T. castaneum Telomeras

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Histokemisk fargning av<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Sekundär cell Väggelement

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analys av global RNA syntes vid den inre cellnivå efter Hypoxi

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Floral-Dip Transformation of Flax (Linum usitatissimum) to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Floral-Dip Transformation of Flax Linum usitatissimum to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Blommor-Dip Omvandling av lin (<em&gt; Linum usitatissimum</em&gt;) För att generera transgena avkommor med en hög Transformation Rate

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Visualisering Stromule frekvens med fluorescensmikroskopi

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Spatiotemporal Investigation of ERL1 Dynamics via Confocal Imaging

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells (Video) | JoVE 

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...