Name: examination of the telomere g-overhang structure in trypanosoma brucei
Uploaded: 2011-01-26T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei at JoVE.com

Nous tenons à remercier le Dr Carolyn Prix pour les discussions scientifiques et suggestions judicieuses. Ce travail est soutenu par le NIH octroi AI066095 (PI: Bibo Li).

1. Détecter T. brucei télomères G-faux à l&#39;aide maternelle hybridation in-gel 3 Principe (Figure 1): Sous la condition indigène, une fin marquée (CCCTAA) 4 (TELC) oligo sonde ne peut s&#39;hybrider avec le télomère simple brin G-faux région. L&#39;intensité d&#39;hybridation est proportionnel à la longueur du surplomb. Après dénaturation et de neutralisation, la même sonde sera capable de s&#39;hybrider à la région des télomères ensemble. L&...

<ol>
	<li>Munoz-Jordan, J. L., Cross, G. A., de Lange, T., Griffith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=t-loops+at+trypanosome+telomeres.">t-loops at trypanosome telomeres.</a> EMBO J. 20, 579-588 (2001).</li><li>Li, B., Espinal, A., Cross, G. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypanosome+telomeres+are+protected+by+a+homologue+of+mammalian+TRF2.">Trypanosome telomeres are protected by a homologue of mammalian TRF2.</a> Mol Cell Biol. 25, 5011-5021 (2005).</li><li>Wellinger, R. J., Wolf, A. J., Zakian, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saccharomyces+telomeres+acquire+single-strand+TG1-3+tails+late+in+S+phase.">Saccharomyces telomeres acquire single-strand TG1-3 tails late in S phase.</a> Cell. 72, 51-60 (1993).</li><li>McElligott, R., Wellinger, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+terminal+DNA+structure+of+mammalian+chromosomes.">The terminal DNA structure of mammalian chromosomes.</a> EMBO J. 16, 3705-3714 (1997).</li><li>Harrington, L. A., Greider, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+primer+specificity+and+chromosome+healing.">Telomerase primer specificity and chromosome healing.</a> Nature. 353, 451-454 (1991).</li><li>Jacob, N. K., Skopp, R., Price, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-overhang+dynamics+at+Tetrahymena+telomeres.">G-overhang dynamics at Tetrahymena telomeres.</a> Embo J. 20, 4299-4308 (2001).</li><li>Barry, J. D., McCulloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+in+trypanosomes:+enhanced+phenotypic+variation+in+a+eukaryotic+parasite.">Antigenic variation in trypanosomes: enhanced phenotypic variation in a eukaryotic parasite.</a> Adv Parasitol. 49, 1-70 (2001).</li><li>Yang, X., Figueiredo, L. M., Espinal, A., Okubo, E., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAP1+is+essential+for+silencing+telomeric+variant+surface+glycoprotein+genes+in+Trypanosoma+brucei.">RAP1 is essential for silencing telomeric variant surface glycoprotein genes in Trypanosoma brucei.</a> Cell. 137, 99-109 (2009).</li></ol>

Trypanosoma brucei provoque la maladie du sommeil chez les humains. Cette maladie, si elle n&#39;est pas traitée, est inévitablement mortelle. T. cellules brucei chez des hôtes mammifères subissent une variation antigénique régulièrement afin d&#39;échapper à l&#39;attaque immunitaire de l&#39;hôte 7. C&#39;est pourquoi il est très difficile d&#39;éliminer T. cellules brucei fois l&#39;infection est établie. Nous avons récemment démontré que les té...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem LE Agarose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>50004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose Type VII (low melting agarose)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A4018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Proteinase K, recombinant, PCR grade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Diagnostic</td>
<td>03 115801001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Exo I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0293</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Exo T</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T7 exonuclease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0263</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T4 DNA polymerase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0203</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>QIAquick nucleotide removal kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>28304</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

examination of the telomere g-overhang structure in trypanosoma brucei

Le G-télomères surplombent structure a été identifiée chez les eucaryotes, y compris de nombreuses levures, les vertébrés, et Trypanosoma brucei. Elle sert de substrat pour la télomérase pour la synthèse de novo d&#39;ADN des télomères et est donc important pour le maintien des télomères. T. brucei est un parasite protozoaire qui provoque la maladie du sommeil chez les humains et le nagana chez les bovins. Une fois infecté hôte mammifère, T. cellulaire brucei commutateurs régulièrement ses antigènes de surface pour échapper à l&#39;attaque immunitaire de l&#39;hôte. Nous avons récemment démontré que le T. brucei télomères structure joue un rôle essentiel dans la régulation de l&#39;expression du gène antigène de surface, ce qui est essentiel pour T. pathogenèse brucei. Toutefois, T. brucei télomères structure n&#39;a pas été étudiée en raison de la limitation des méthodes d&#39;analyse de cette structure spécialisée. Nous avons maintenant adopté avec succès le natif de gel-hybridation et ligation médiée par des méthodes d&#39;extension d&#39;amorces pour l&#39;examen des télomères G-faux structure et une méthode de ligature adaptateur pour la détermination de la borne télomères nucléotides dans T. cellules brucei. Ici, nous allons décrire les protocoles en détail et comparer leurs avantages et leurs limites.

Watch this Scientific Journal Video about Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei at JoVE.com

Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei

Les télomères sont essentiels pour la stabilité des chromosomes et le G-télomères surplombent la structure est essentielle pour la télomérase médiée par le maintien des télomères. Nous avons récemment adopté deux méthodes pour détecter les télomères G-faux structure dans<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt;, Qui sont natifs en gel d&#39;hybridation et la ligature médiée par extension d&#39;amorce, qui seront décrits.

L&#39;examen des télomères G-structure en porte à faux Trypanosoma brucei</em

The telomere G-overhang structure has been identified in many eukaryotes including yeast, vertebrates, and Trypanosoma brucei. It serves as the substrate ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Immunology and Infection

Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei

Genetics

DNA Structure and Function

SCIENTISTS IN ACTION

Microwave Assisted Rapid Diagnosis of Plant Virus Diseases by Transmission Electron Microscopy

Micro-ondes assistée diagnostic rapide des maladies virales des plantes par microscopie électronique à transmission

Investigations of ultrastructural changes induced by viruses are often necessary to clearly identify viral diseases in plants. With conventional sample ...

Recherche

Immunologie et infection

Multi-target Parallel Processing Approach for Gene-to-structure Determination of the Influenza Polymerase PB2 Subunit

Multi-cible approche de traitement parallèle pour Gene à la structure Détermination de la polymérase de l&#39;influenza PB2 Subunit

Pandemic outbreaks of highly virulent influenza strains can cause widespread morbidity and mortality in human populations worldwide. In the United States ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

L&#39;examen de sélection positive et négative thymique par cytométrie en flux

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia de culture du système nerveux central néonatale et de l&#39;adulte

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

L&#39;isolement, la caractérisation et de l&#39;examen fonctionnel du Réseau de cellules gingivale immunitaire

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Haut-débit Gene Tagging dans<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

détection de la<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt; Switching Variant de glycoprotéine de surface par magnétique tri cellulaire activé et cytométrie de flux

Trypanosoma brucei, a protozoan parasite that causes both Human and Animal African Trypanosomiasis (known as sleeping sickness and nagana, respectively) ...

Examination of Host Phenotypes in Gambusia affinis Following Antibiotic Treatment

Examination of Host Phenotypes in Gambusia affinis Following Antibiotic Treatment

Examen des phénotypes d&#39;accueil en<em&gt; affinis de Gambusia</em&gt; Après le traitement aux antibiotiques

The commonality of antibiotic usage in medicine means that understanding the resulting consequences to the host is vital. Antibiotics often decrease host ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Évaluation de la cytotoxique et effets immunomodulateurs de Substances dans des tranches de poumon humain de coupe de précision

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Quantitative Examination of Antibiotic Susceptibility of Neisseria gonorrhoeae Aggregates Using ATP-utilization Commercial Assays and Live/Dead Staining

Quantitative Examination of Antibiotic Susceptibility of Neisseria gonorrhoeae Aggregates Using ATP-utilization Commercial Assays and Live/Dead Staining

Examen quantitatif de la sensibilité aux antibiotiques d’essais commerciaux de Neisseria gonorrhoeae utilisation d’ATP à l’aide de granulats et de Live/Dead coloration

The emergence of antibiotic resistant Neisseria gonorrhoeae (GC) is a worldwide health threat and highlights the need to identify individuals who fail ...