Name: examination of the telomere g-overhang structure in trypanosoma brucei
Uploaded: 2011-01-26T17:00:00
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Wir möchten Dr. Carolyn Preis für wissenschaftliche Diskussionen und aufschlussreiche Anregungen bedanken. Diese Arbeit wird durch NIH AI066095 (: Bibo Li PI) unterstützt.

1. Detect T. brucei Telomere G-Überhang mit Native In-Gel-Hybridisierung 3 Prinzip (Abbildung 1): Unter nativen Zustand ein Ende-markierten (CCCTAA) 4 (TELC) Oligo-Sonde kann nur die einsträngige Telomer G-Überhang Region hybridisieren. Die Hybridisierung Intensität ist proportional zur Länge des Überhangs. Nach der Denaturierung und Neutralisation, wird die gleiche Sonde in der Lage sein, die ganze Telomer Region hybridisieren. Die Hybridisierung Intensit?...

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	<li>Munoz-Jordan, J. L., Cross, G. A., de Lange, T., Griffith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=t-loops+at+trypanosome+telomeres.">t-loops at trypanosome telomeres.</a> EMBO J. 20, 579-588 (2001).</li><li>Li, B., Espinal, A., Cross, G. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypanosome+telomeres+are+protected+by+a+homologue+of+mammalian+TRF2.">Trypanosome telomeres are protected by a homologue of mammalian TRF2.</a> Mol Cell Biol. 25, 5011-5021 (2005).</li><li>Wellinger, R. J., Wolf, A. J., Zakian, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saccharomyces+telomeres+acquire+single-strand+TG1-3+tails+late+in+S+phase.">Saccharomyces telomeres acquire single-strand TG1-3 tails late in S phase.</a> Cell. 72, 51-60 (1993).</li><li>McElligott, R., Wellinger, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+terminal+DNA+structure+of+mammalian+chromosomes.">The terminal DNA structure of mammalian chromosomes.</a> EMBO J. 16, 3705-3714 (1997).</li><li>Harrington, L. A., Greider, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+primer+specificity+and+chromosome+healing.">Telomerase primer specificity and chromosome healing.</a> Nature. 353, 451-454 (1991).</li><li>Jacob, N. K., Skopp, R., Price, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-overhang+dynamics+at+Tetrahymena+telomeres.">G-overhang dynamics at Tetrahymena telomeres.</a> Embo J. 20, 4299-4308 (2001).</li><li>Barry, J. D., McCulloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+in+trypanosomes:+enhanced+phenotypic+variation+in+a+eukaryotic+parasite.">Antigenic variation in trypanosomes: enhanced phenotypic variation in a eukaryotic parasite.</a> Adv Parasitol. 49, 1-70 (2001).</li><li>Yang, X., Figueiredo, L. M., Espinal, A., Okubo, E., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAP1+is+essential+for+silencing+telomeric+variant+surface+glycoprotein+genes+in+Trypanosoma+brucei.">RAP1 is essential for silencing telomeric variant surface glycoprotein genes in Trypanosoma brucei.</a> Cell. 137, 99-109 (2009).</li></ol>

Trypanosoma brucei verursacht Schlafkrankheit beim Menschen. Diese Krankheit, die unbehandelt unweigerlich tödlich. T. brucei Zellen in Säugetierwirten unterziehen antigene Variation regelmäßig, so dass das Immunsystem des Wirts Attacke 7 auszuweichen. Daher ist es sehr schwierig, T. beseitigen brucei Zellen einmal eine Infektion festgestellt wird. Wir haben kürzlich gezeigt, dass die Telomere eine wichtige Rolle spielen bei der Regulierung der Expression von T. br...

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		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem LE Agarose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>50004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose Type VII (low melting agarose)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A4018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Proteinase K, recombinant, PCR grade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Diagnostic</td>
<td>03 115801001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Exo I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0293</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Exo T</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T7 exonuclease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0263</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T4 DNA polymerase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NEB</td>
<td>M0203</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>QIAquick nucleotide removal kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>28304</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

examination of the telomere g-overhang structure in trypanosoma brucei

Die Telomer-G-Überhang Struktur hat sich in vielen Eukaryonten, einschließlich Hefe, Wirbeltieren und Trypanosoma brucei identifiziert worden. Es dient als Substrat für die Telomerase für die de novo Telomere DNA-Synthese und ist daher für Telomererhaltung wichtig. T. brucei ist ein einzelliger Parasit, dass die Schlafkrankheit bei Menschen und Nagana bei Rindern verursacht. Einmal infiziert Säugerwirt, T. brucei Zelle regelmäßig wechselt seinen Oberflächen-Antigen auf das Immunsystem des Wirts Angriff auszuweichen. Wir haben kürzlich gezeigt, dass die T. brucei Telomer-Struktur spielt eine wesentliche Rolle bei der Regulation der Oberflächen-Antigen Genexpression, die kritisch für T. ist brucei Pathogenese. Allerdings T. brucei Telomer-Struktur noch nicht ausführlich untersucht worden aufgrund der Begrenzung von Methoden zur Analyse dieser speziellen Struktur. Wir haben nun erfolgreich die einheimische In-Gel-Hybridisierung und Ligation-vermittelte Primer-Extension-Methoden zur Untersuchung der Telomer-G-Überhang-Struktur und eine Adaptorligation Methode zur Bestimmung der Telomere terminalen Nukleotids in T. angenommen brucei Zellen. Hier werden wir die Protokolle im Detail zu beschreiben und vergleichen ihre verschiedenen Vor-und Nachteile.

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Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei

Telomere sind unerlässlich für das Chromosom Stabilität und die Telomer-G-Überhang Struktur ist essentiell für Telomerase-vermittelte Telomererhaltung. Wir haben vor kurzem zwei Verfahren zum Nachweis der Telomer-G-Überhang Struktur in verabschiedet<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt; Sind die einheimischen In-Gel-Hybridisierung und Ligation-vermittelte Primer-Extension, die beschrieben werden.

Die Untersuchung der Telomere G-Überhang Struktur in Trypanosoma brucei

The telomere G-overhang structure has been identified in many eukaryotes including yeast, vertebrates, and Trypanosoma brucei. It serves as the substrate ...

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Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei

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DNA Structure and Function

SCIENTISTS IN ACTION

Microwave Assisted Rapid Diagnosis of Plant Virus Diseases by Transmission Electron Microscopy

Mikrowelle Assisted Schnelle Diagnose von Plant Virus Erkrankungen durch Transmission Electron Microscopy

Investigations of ultrastructural changes induced by viruses are often necessary to clearly identify viral diseases in plants. With conventional sample ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Multi-target Parallel Processing Approach for Gene-to-structure Determination of the Influenza Polymerase PB2 Subunit

Multi-Target-Parallel Processing Ansatz zur Gene-to-Struktur Bestimmung der Influenza Polymerase PB2-Untereinheit

Pandemic outbreaks of highly virulent influenza strains can cause widespread morbidity and mortality in human populations worldwide. In the United States ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

Prüfung Thymic positive und negative Selektion mittels Durchflusszytometrie

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Kultivierung Mikroglia aus dem Neugeborenen und Erwachsenen Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolierung, Charakterisierung und funktionelle Untersuchung des Zahnfleisch Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Hochdurchsatz-Gene Tagging in<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

Nachweis von<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt; Variante Oberflächen-Glykoprotein Switching von Magnetic Activated Cell Sorting und Durchflusszytometrie

Trypanosoma brucei, a protozoan parasite that causes both Human and Animal African Trypanosomiasis (known as sleeping sickness and nagana, respectively) ...

Examination of Host Phenotypes in Gambusia affinis Following Antibiotic Treatment

Examination of Host Phenotypes in Gambusia affinis Following Antibiotic Treatment

Die Prüfung der Host-Phänotypen in<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Nach der Behandlung mit Antibiotika

The commonality of antibiotic usage in medicine means that understanding the resulting consequences to the host is vital. Antibiotics often decrease host ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Bewertung der zytotoxischen und immunmodulatorische Wirkung von Substanzen im menschlichen Precision-Cut Lung Slices

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Quantitative Examination of Antibiotic Susceptibility of Neisseria gonorrhoeae Aggregates Using ATP-utilization Commercial Assays and Live/Dead Staining

Quantitative Examination of Antibiotic Susceptibility of Neisseria gonorrhoeae Aggregates Using ATP-utilization Commercial Assays and Live/Dead Staining

Quantitative Untersuchung der Antibiotikaempfindlichkeit von Neisseria Gonorrhoeae Aggregate verwenden ATP-Auslastung kommerziellen Assays und Live/Dead Färbung

The emergence of antibiotic resistant Neisseria gonorrhoeae (GC) is a worldwide health threat and highlights the need to identify individuals who fail ...