Name: bimolecular fluorescence complementation (bifc) assay for protein-protein interaction in onion cells using the helios gene gun
Uploaded: 2010-06-12T17:00:00
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<p class="jove_content"> हम डीआरएस धन्यवाद. स्टीव माउंट और Xiaoning झांग 35S के लिए: GFP pGlowbug निर्माण और जेड एस ल प्रयोगशाला में Hokensen दर्पण अनुसंधान डॉक्टरेट फैलोशिप अमेरिका के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (IOB0616096 और MCB0744752) द्वारा समर्थित है. ZL आंशिक रूप से मैरीलैंड कृषि प्रयोग स्टेशन के विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित है. </p>

<p class="jove_title"> I. प्लाज्मिड तैयारी </p><p class="jove_content"> प्लाज्मिड बमबारी के लिए इस्तेमाल किया डीएनए उच्च शुद्धता और 500ng/μl या अधिक से अधिक के एकाग्रता में किया जाना चाहिए. BiFC दो प्लाज्मिड constructs शामिल करने के लिए, प्रत्येक प्लाज्मिड ?...

<ol>
	<li>Hu, C. D., Chinenov, Y., Kerppola, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+interactions+among+bZIP+and+Rel+family+proteins+in+living+cells+using+bimolecular+fluorescence+complementation.">Visualization of interactions among bZIP and Rel family proteins in living cells using bimolecular fluorescence complementation.</a> <em style='font-style: italic'>Mol Cell</em>. <b>9</b> (4), 789-789 (2002).</li><li>Sitaraman, J., Bui, M., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LEUNIG_HOMOLOG+and+LEUNIG+perform+partially+redundant+functions+during+Arabidopsis+embryo+and+floral+development.">LEUNIG_HOMOLOG and LEUNIG perform partially redundant functions during Arabidopsis embryo and floral development.</a> <em style='font-style: italic'>Plant Physiol</em>. <b>147</b> (2), 672-672 (2008).</li><li>Walter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+protein+interactions+in+living+plant+cells+using+bimolecular+fluorescence+complementation.">Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation.</a> <em style='font-style: italic'>Plant J</em>. <b>40</b> (3), 428-428 (2004).</li><li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture.">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> <em style='font-style: italic'>J Vis Exp</em>. , (2008).</li><li>Azhakanandam, S., Nole-Wilson, S., Bao, F., Franks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SEUSS+and+AINTEGUMENTA+mediate+patterning+and+ovule+initiation+during+gynoecium+medial+domain+development.">SEUSS and AINTEGUMENTA mediate patterning and ovule initiation during gynoecium medial domain development.</a> <em style='font-style: italic'>Plant Physiol</em>. <b>146</b> (3), 1165-1165 (2008).</li><li>Zhang, X. N., Mount, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+alternatively+spliced+isoforms+of+the+Arabidopsis+SR45+protein+have+distinct+roles+during+normal+plant+development.">Two alternatively spliced isoforms of the Arabidopsis SR45 protein have distinct roles during normal plant development.</a> <em style='font-style: italic'>Plant Physiol</em>. <b>150</b> (3), 1450-1450 (2009).</li></ol>

<ol><li> पहली बार उपयोगकर्ताओं के लिए, हम पूरी प्रक्रिया का अभ्यास करने की सलाह देते हैं, एक एकल 35S जैसे प्लाज्मिड विधान संवाददाता के साथ कारतूस तैयारी से अवलोकन करने के लिए: GFP या 35S: गस. हम एक 35S इस्तेमाल किया: प्लाज्मिड GFP ?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Yellow onion</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any supermarket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Helios Gene Gun</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioRad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope with appropriate filters for GFP or YFP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss, Nikon, Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

bimolecular fluorescence complementation (bifc) assay for protein-protein interaction in onion cells using the helios gene gun

<p class="jove_content">विविध जीवों में जीन समारोह की जांच कैसे जीन उत्पादों अपने सामान्य सेलुलर वातावरण में एक दूसरे के साथ बातचीत के ज्ञान पर निर्भर करता है. Bimolecular प्रतिदीप्ति complementation परख (BiFC)<sup&gt; 1</sup&gt; शोधकर्ताओं जीवित कोशिकाओं में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत कल्पना करने के लिए अनुमति देता है और एक आवश्यक अनुसंधान उपकरण बन गया है. इस परख कि प्रत्येक एक संभावित बातचीत प्रोटीन साथी इनकार कर रहे हैं एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) के दो टुकड़े की सुविधा सहयोग पर आधारित है. दो प्रोटीन भागीदारों की बातचीत एन टर्मिनल और GFP के सी - टर्मिनल टुकड़ा के सहयोग की सुविधा, प्रतिदीप्ति के लिए अग्रणी होगा. संयंत्र के शोधकर्ताओं के लिए, प्याज epidermal कोशिकाओं की वजह से प्राप्त करने और प्याज ऊतकों की तैयारी में आसानी और कम से कम पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति के साथ प्रतिदीप्ति के प्रत्यक्ष दृश्य BiFC परख के संचालन के लिए एक आदर्श प्रायोगिक प्रणाली रहे हैं. जीन Helios गन (BioRad) आमतौर पर प्याज कोशिकाओं में प्लास्मिड डीएनए बौछार करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हम प्रदर्शन का उपयोग जीन गन Helios के लिए दो बातचीत के लिए प्लाज्मिड constructs परिचय<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; प्रतिलेखन कारकों (एस ई यू) सिअस और LEUNIG HOMOLOG (LUH)<sup2&gt;</sup&gt; और उनके द्वारा मध्यस्थता प्याज epidermal कोशिकाओं में BiFC बातचीत के दृश्य.</p>

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Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

<p class="jove_content">यह आलेख दिखाता है कि कैसे ठीक से इस्तेमाल करने के लिए BioRad जीन गन Helios प्याज epidermal कोशिकाओं में प्लास्मिड डीएनए परिचय और प्याज कोशिकाओं में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत bimolecular प्रतिदीप्ति complementation के सिद्धांत (BiFC) पर आधारित के लिए परीक्षण</p>

Bimolecular प्याज जीन Helios गन का उपयोग कक्ष में प्रतिदीप्ति complementation (BiFC) प्रोटीन प्रोटीन सहभागिता के लिए परख

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Research

JoVE Journal

Biology

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Hippocampal न्यूरॉन्स के जीन बंदूक अभिकर्मक

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जीन गन बुलेट और स्लाइस संस्कृति में न्यूरॉन्स की Biolistic अभिकर्मक की तैयारी

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

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Defining the subcellular distribution of signaling complexes is imperative to understanding the output from that complex. Conventional methods such as ...

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Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

संयंत्र में प्रोटीन बातचीत एक गेटवे संगत bimolecular प्रतिदीप्ति (BiFC) complementation सिस्टम का उपयोग की जांच

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एक तरल चरण आत्मीयता कब्जा चुंबकीय मोती का उपयोग करने के लिए प्रोटीन से प्रोटीन सहभागिता अध्ययन परख: उदाहरण पोलियो वायरस Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

SECM गिरफ्तार अनुक्रम एक ribosome बाध्य polypeptides पृथक उपकरण के रूप में का उपयोग

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

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Bimolecular प्रतिदीप्ति complementation का प्रवाह cytometric विश्लेषण: प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक उच्च Throughput मात्रात्मक विधि

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

तंबाकू protoplasts और पत्तियों में Bimolecular प्रतिदीप्ति complementation द्वारा कल्पना प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Bioluminescence प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण का प्रयोग जीवित कोशिकाओं में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत की जांच कर

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

एक नैनोमीटर सटीकता के साथ प्रतिदीप्ति इमेजिंग (फियोना)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...