Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

المؤلفان بالشكر جانيت Rossant للبروتوكول الأصلي. وأيد هذه الدراسة من قبل المعهد الوطني للصحة منح CA106308 إلى WH.

في هذا البروتوكول ، ونحن تصف إعداد blastocysts الماوس وإنشاء خطوط الخلايا TS. التلاعب الماوس قبل عام لجمع blastocysts ، بما في ذلك إعداد لالتزاوج الطبيعي وتحريض الاباضة عظمى ، اتبع أساسا بروتوكول قياسي يتضح من ناجي وآخرون 2003 (pp146 - 150). الاش...

<ol>
	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

في هذا الفيديو ، ونحن لشرح عملية جمع E3.5 blastocysts من إجراءات الرحم والتجريبية لإنشاء خطوط الخلايا TS. كما وصفنا شرط للحفاظ على الخلايا stemness TS وللحث على التمايز إلى خلايا متمايزة. اثنين من الخطوات الحاسمة للحصول على خطوط خلايا نقي TS هي ثمرة توقيت التفكيك (الخطوة 9) ، وتجهيز ?...

الكواشف TS المتوسط ​​: RPMI - 1640 ، FBS 20 ٪ ، 1 البيروفات الصوديوم مم ، 100 مم المركابتويثانول بيتا و 100 ملغ / مل الستربتوميسين البنسلين. Mitomycin C : حل 2 ملغ mitomycin C (سيغما M - 0503) في برنامج تلفزيوني 2 مل وإضافة هذا الخليط 2 مل الى 200 مل المتوسطة TS (10 نانوغرام / مل). جعل aliquots 20 (10 مل) ، ومخزن في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. إضافة واحد في لوحة قسامة 100 ملم. الفأر الجنينية الليفية ، شرط المتوسطة (MEF - CM) : لوحة لوحات MEFs في 100 ملم (1 × 10 6 / لوحة). اليوم التالي ، وإضافة 10 مل TS المتوسطة في صحن والاستمرار في الثقافة لمدة 48 ساعة. جمع مستنبت تصفية منهم (0.45 ملم) وتخزينها في -20 درجة مئوية في aliquots مل 35. أذاب كل قسامة عند الحاجة التي يمكن تخزينها في 4 درجات مئوية. يمكن استخدام MEFs للتحضير لاثنين من أكثر دفعات من CM قبل أن تصبح متموجة. PBS / جيش صرب البوسنة : حل جيش صرب البوسنة ، والخامس الكسر (سيغما A3311 ، 0.1 ٪ (W / V)) في برنامج تلفزيوني (10 مل) ، وتصفيتها من خلال تصفية 0.45 ملم حقنة وجعل 1 aliquots مل في 1.5 مل من الأنابيب. المحل في -70 درجة مئوية ، وذوبان الجليد أنبوب واحد عند الحاجة لإعداد FGF4. FGF4 (1000x) : Resuspend مجفد FGF4 (سيغما F8424 ، 25 ملغ) مع 1 مل من محلول PBS / جيش صرب البوسنة. مزيج جيد وجعل 10 aliquots (100 مل) إلى 1.5 مل وتخزين أنابيب في -70 درجة مئوية. أذاب كل أنبوب عند الحاجة وتخزين المتبقي في 4 درجات مئوية ، لا إعادة التجميد. تمييع 1000 مرة في المتوسط ​​في الحصول على TS 1X FGF4 (25 نانوغرام / مل). الهيبارين (1000x) : Resuspend الهيبارين (سيغما H3149 ، 10000 وحدة) في برنامج تلفزيوني لتركيز النهائي من 1 ملغ / مل (1000x). 100 مل جعل aliquots إلى 1.5 مل وتخزين أنابيب في -70 درجة مئوية. aliquots ذوبان الجليد عند الحاجة وتخزين المتبقي في 4 درجات مئوية ، لا إعادة التجميد. الوقت في تمييع 1000 TS المتوسطة للحصول على 1X الهيبارين (1 نانوغرام / مل).

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

مواصفات الأديم الظاهر الغاذي هي واحدة من أقرب الأحداث تمايز التنمية الثدييات. نسب الأرومة الغاذية المستمدة من الأديم الظاهر الغاذي يتوسط الزرع ويولد الجنين جزء من المشيمة. نتيجة لذلك ، تطور هذه النسب ضرورية لبقاء الجنين. وكان أول وصف اشتقاق خلايا الأرومة الغاذية (TS) تنبع من blastocysts الماوس بواسطة تاناكا<em&gt; وآخرون.</em&gt; 1998. قدرة الخلايا TS للحفاظ على الممتلكات الخاصة والأرومة الغاذية التعبير عنها نوع من علامات محددة ومرحلة الخلية بعد التحفيز السليم يوفر نظام نموذجا قيما للتحقيق في الأرومة الغاذية التنمية النسب حيث تلخص أحداث المشيمة المبكر. وعلاوة على ذلك ، وخلايا الأرومة الغاذية هي واحدة من الأنواع القليلة الخلايا الجسدية الطبيعية التي تمر التضخيم الجينوم. على الرغم من أن المسارات الجزيئية الكامنة وراء polyploidization الأرومة الغاذية قد بدأت في الانهيار ، ودور الفسيولوجية والاستفادة من التضخيم الجينوم الأرومة الغاذية لا يزال بعيد المنال الى حد كبير. تطوير الخلايا الجذعية إلى خلايا الأرومة الغاذية ضعفاني المتعددة الصبغيات في الثقافة يجعل هذا<em&gt; خارج الحي</em&gt; النظام أداة ممتازة لتوضيح آلية تنظيمية من النسخ المتماثل الجينوم وعدم الاستقرار في الصحة والمرض. نحن هنا وصف بروتوكول استنادا إلى التقارير السابقة مع تعديل نشرت في تشيو<em&gt; وآخرون.</em&gt; 2008.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

في هذا الفيديو ، ونظهر عزلة blastocysts الماوس واشتقاق الخلايا الجذعية من الأرومة الغاذية blastocysts. وصفنا أيضا الظروف الملائمة لصيانة الممتلكات الخلايا الجذعية ، وكذلك الحث التمايز في الثقافة.

اشتقاق الخلايا الجذعية من الأرومة الغاذية Blastocysts

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

اشتقاق خلايا الجذعية المكونة للدم من الفئران خلايا الجذعية الجنينية

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

اشتقاق الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التي Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

العزلة واشتقاق خلايا الفأر الجنينية بيرشوت

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

عزل الخلايا الجذعية من شبكية العين بالعين ماوس

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

عزل خلايا الأرومة الغاذية الابتدائية ماوس والأرومة الغاذية الفحص الغزو

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

كفاءة اشتقاق السلائف القلب البشري وافرة القوة العضلية من خلايا المنشأ الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

مسلسل إثراء الجذعية والخلايا الاولية الظروف المناسبة (جان معايير الأمان) في الثقافة لاشتقاق على المدى الطويل الكبار ماوس خطوط SSC

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

الاستقراء وتحليل الظهارية الوسيطة الانتقالية ل

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

العزلة وثقافة الأسنان طلائي الخلايا الجذعية من الكبار ماوس القاطعة

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...