Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

המחברים מודים ג&#39;נט Rossant עבור הפרוטוקול המקורי. מחקר זה מומן על ידי המכון הלאומי לבריאות מענק CA106308 ל WH.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים את הכנת blastocysts עכבר והקמת קווי TS התא. מניפולציות עכבר כללי לפני גביית blastocysts, כולל הגדרת עבור ההזדווגות הטבעי הגיוס הביוץ סופר, בעצם לעקוב אחר הפרוטוקול הסטנדרטי מאויר על ידי נאגי ואח&#39;. 2003 (pp146-150). גזיר?...

<ol>
	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את תהליך לאסוף E3.5 blastocysts מהנהלים uteri וניסיוני להקים שורות תאים TS. אנו גם מתארים את המצב כדי לשמור על stemness של תאים TS כדי להשרות התמיינות לתאים שלהם מובחנים. שני צעדים קריטיים להשגת טהור שורות תאים TS הם עיתוי disaggregation תוצאה (שלב 9) ועיבוד המעבר הרא?...

ריאגנטים TS בינוני: RPMI-1640, FBS 20%, 1 mM pyruvate נתרן, 100 מ&quot;מ, בטא mercaptoethanol ו 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​פניצילין, סטרפטומיצין. Mitomycin C: ממיסים 2 מ&quot;ג mitomycin C (Sigma M-0503) ב 2 מ&quot;ל PBS ומוסיפים את התערובת לתוך בינוני 2 מ&quot;ל 200 מ&quot;ל TS (10 ng / ml). בצע 20 aliquots (10 מ&quot;ל) ולאחסן ב -20 ° C עד השימוש. מוסיפים לכל צלחת aliquot 100 מ&quot;מ. עכבר עובריים פיברובלסטים, מצבו בינוני (MEF-CM): פלייט MEFs ב 100 מ&quot;מ צלחות (1 x 10 6 / צלחת). למחרת, להוסיף 10 מ&quot;ל בינוני TS לכל צלחת וממשיכים התרבות במשך 48 שעות. איסוף בינוני תרבות, לסנן אותם (0.45 מ&quot;מ) ולאחסן ב -20 מעלות 35 aliquots מ&quot;ל. הפשירי כל aliquot בעת הצורך, אשר ניתן לאחסן 4 ° C. MEFs ניתן להשתמש כדי להכין שתי קבוצות של CM יותר לפני שהן הופכות ומחוברות. PBS / BSA: ממיסים BSA, חלק V (Sigma A3311, 0.1% (w / v)) ב-PBS (10 מ&quot;ל), לסנן באמצעות מזרק 0.45 מ&quot;מ לסנן ולעשות 1 aliquots מ&quot;ל 1.5 מ&quot;ל צינורות. חנות ב -70 ° C ו להפשיר שפופרת אחת בעת הצורך להכין FGF4. FGF4 (1000x): Resuspend lyophilized FGF4 (Sigma F8424, 25 מ&quot;ג) עם 1 מ&quot;ל של תמיסת PBS / BSA. מערבבים היטב את 10 aliquots (100 מ&quot;ל) לתוך צינורות 1.5 מ&quot;ל ולאחסן ב -70 ° C. הפשירי כל הצינור בעת הצורך ולאחסן הנותרים בבית 4 ° C, אין להקפיא מחדש. מדולל 1000 פעמים בינוני TS להשיג 1x FGF4 (25 ng / ml). הפרין (1000x): Resuspend הפרין (Sigma H3149, 10,000 יחידות) ב-PBS לריכוז סופי של 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​(1000x). הפוך את 100 מ&quot;ל aliquots לתוך צינורות 1.5 מ&quot;ל ולאחסן ב -70 ° C. Aliquots הפשירי בעת הצורך ולאחסן הנותרים בבית 4 ° C, לא להקפיא מחדש. מדולל 1000 זמן בינוני TS להשיג 1x הפרין (1 ng / ml).

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

מפרט של trophectoderm הוא אחד האירועים בידול המוקדם של התפתחות היונקים. השושלת trophoblast נגזר ההשתלה trophectoderm מתווכת ומייצר את החלק העוברי של השליה. כתוצאה מכך, את הפיתוח של שושלת זו היא חיונית להישרדות העובר. גזירת trophoblast גזע (TS) תאים blastocysts עכבר תוארה לראשונה על ידי טנקה<em&gt; Et al.</em&gt; 1998. היכולת של תאים TS לשמור על רכוש trophoblast ספציפיים הביטוי שלהם הבמה ואת סוג התא הסמנים הספציפיים אחרי גירוי מתאים מספק מערכת מודל ערך לחקור את שושלת היוחסין פיתוח trophoblast לפיה השחזור אירועים placentation מוקדם. יתר על כן, התאים trophoblast הם אחד מסוגי כמה תאים סומטיים עוברת הגברה הגנום טבעי. אף על פי המסלולים המולקולריים שבבסיס polyploidization trophoblast החלו להיפרם, התפקיד יתרון פיזיולוגי של הגברה הגנום trophoblast נותר חמקמק ברובו. הפיתוח של בתאי גזע לתאי דיפלואידי trophoblast polyploid בתרבות עושה את זה<em&gt; לשעבר vivo</emמערכת&gt; כלי מצוין עבור הבהרת מנגנון הרגולציה של שכפול הגנום וחוסר היציבות בריאות ומחלות. כאן אנו מתארים פרוטוקול מבוסס על דיווחים קודמים עם שינוי שפורסם Chiu<em&gt; Et al.</em&gt; 2008.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את בידודה של blastocysts העכבר ואת הגזירה של בתאי גזע trophoblast מ blastocysts. אנחנו גם לתאר את תנאי תחזוקה של הנכס בתאי גזע, כמו גם גיוס של בידול בתרבות.

גזירת Trophoblast עכבר בתאי גזע Blastocysts

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

בידוד גזירת תאים עובריים בעכבר ז&#39;רמינל

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

בידוד של תאים ראשוניים עכבר Trophoblast וAssay הפלישה Trophoblast

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

גזירת יעיל של מבשרי לב cardiomyocytes האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

העשרה סידורית של גזע Spermatogonial ותאי אב (SSCs) בתרבות לגזירת קווי SSC מאוסים למבוגרים לזמן ארוך

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

בידוד והתרבות של תאי גזע השיניים אפיתל ממבוגרי העכבר הארקטיק

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...