Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

लेखकों मूल प्रोटोकॉल के लिए जेनेट Rossant धन्यवाद. यह अध्ययन राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान क के लिए CA106308 संस्थान द्वारा समर्थित किया गया.

इस प्रोटोकॉल में, हम माउस blastocysts और टीएस सेल लाइनों की स्थापना की तैयारी का वर्णन. जनरल माउस जोड़तोड़ blastocysts के संग्रह, प्राकृतिक सहवास के लिए सेट अप और सुपर ovulation के प्रेरण सहित, पहले मूल रूप से मानक प्रोटोकॉल ...

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	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

इस वीडियो में, हम प्रक्रिया ग्रीवा और प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं से E3.5 blastocysts इकट्ठा करने के लिए टीएस सेल लाइनों की स्थापना प्रदर्शित करता है. हम भी टीएस कोशिकाओं के stemness बनाए रखने और विभेदित कोशिकाओं में भे?...

अभिकर्मकों टीएस मध्यम: RPMI-1640, 20% FBS, 1 मिमी सोडियम पाइरूवेट, 100 मिमी बीटा mercaptoethanol और 100 मिलीग्राम / एमएल पेनिसिलिन - स्ट्रेप्टोमाइसिन. Mitomycin सी: 2 मिलीलीटर पीबीएस में 2 मिलीग्राम mitomycin सी (सिग्मा एम - 0503) को भंग करने और 200 मिलीलीटर टीएस मध्यम (10 एनजी / एमएल) में इस 2 मिलीलीटर मिश्रण जोड़ें. -20 डिग्री सेल्सियस पर 20 (10 मिलीलीटर) और aliquots दुकान उपयोग करें जब तक बनाओ. 100 मिमी प्लेट प्रति एक विभाज्य जोड़ें. माउस भ्रूण fibroblast हालत मध्यम (MEF मुख्यमंत्री): 100 मिमी प्लेट में प्लेट MEFs (1 x 6 थाली / 10). अगले दिन, पकवान प्रति 10 मिलीलीटर टीएस मध्यम जोड़ने और संस्कृति को जारी रखने के 48 घंटे के लिए. संस्कृति के माध्यम लीजिए, उन्हें फ़िल्टर (0.45 मिमी) और -20 डिग्री सेल्सियस पर 35 मिलीलीटर aliquots में दुकान. प्रत्येक विभाज्य जब जरूरत ° सी. जो 4 में संग्रहीत किया जा सकता है है पहले गला लें MEFs मुख्यमंत्री के दो बैचों के लिए तैयार इससे पहले कि वे मिला हुआ हो करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. पीबीएस / BSA: BSA पीबीएस (10 मिलीलीटर), फिल्टर में, अंश वी (सिग्मा A3311, 0.1% (w / v)) 0.45 मिमी सिरिंज फिल्टर के माध्यम से भंग और 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों में 1 मिलीलीटर aliquots करें. -70 पर स्टोर डिग्री सेल्सियस और एक ट्यूब गल जब FGF4 तैयार करने की जरूरत है. FGF4 (1000x): पीबीएस / BSA समाधान के 1 मिलीलीटर के साथ Resuspend lyophilized FGF4 (F8424 सिग्मा, 25 मिलीग्राम). अच्छी तरह मिक्स और -70 में 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों और दुकान में 10 aliquots (100 मिलीलीटर) बनाने डिग्री सेल्सियस प्रत्येक ट्यूब पहले गला लें, जब जरूरत है और शेष 4 में दुकान डिग्री सेल्सियस, नहीं कर रहे हैं फ्रीज. टीएस मध्यम में 1000 बार पतला FGF4 1x (25 एनजी / एमएल) प्राप्त. हेपरिन (1000x): Resuspend पीबीएस में (H3149 सिग्मा, 10,000 इकाइयों) 1 के एक अंतिम एकाग्रता हेपरिन मिलीग्राम / एमएल (1000x). -70 में 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों और दुकान में 100 मिलीलीटर aliquots डिग्री सेल्सियस पिघलना जब जरूरत और शेष 4 बजे दुकान aliquots डिग्री सेल्सियस, फिर फ्रीज नहीं है. टीएस मध्यम में 1000 समय पतला करने के लिए 1x हेपरिन (1 एनजी / एमएल) प्राप्त करने के लिए.

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

Trophectoderm की विशिष्टता स्तनधारी विकास की जल्द से जल्द भेदभाव की घटनाओं में से एक है. ट्रोफोब्लास्ट trophectoderm mediates आरोपण से व्युत्पन्न और वंश नाल के भ्रूण भाग उत्पन्न करता है. एक परिणाम के रूप में, इस वंश के विकास के भ्रूण के अस्तित्व के लिए आवश्यक है. माउस blastocysts से ट्रोफोब्लास्ट स्टेम कोशिकाओं (टीएस) की व्युत्पत्ति पहले तनाका द्वारा वर्णित किया गया था<em&gt; एट अल.</em1998&gt;. टीएस कोशिकाओं की क्षमता उचित उत्तेजना के बाद ट्रोफोब्लास्ट विशिष्ट संपत्ति है और मंच और सेल प्रकार विशिष्ट मार्करों के उनकी अभिव्यक्ति की रक्षा एक मूल्यवान मॉडल ट्रोफोब्लास्ट वंश के विकास की जांच जिससे जल्दी placentation घटनाओं recapitulating प्रणाली प्रदान करता है. इसके अलावा, ट्रोफोब्लास्ट कोशिकाओं कुछ दैहिक सेल प्रकार प्राकृतिक जीनोम प्रवर्धन के दौर से गुजर रहे हैं. हालांकि ट्रोफोब्लास्ट polyploidization अंतर्निहित आणविक रास्ते को सुलझाना शुरू कर दिया है, शारीरिक और ट्रोफोब्लास्ट जीनोम प्रवर्धन की भूमिका लाभ काफी हद तक मायावी रहता है. द्विगुणित संस्कृति में polyploid ट्रोफोब्लास्ट कोशिकाओं में स्टेम कोशिकाओं के विकास बनाता है<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; प्रणाली के स्वास्थ्य और रोग में जीनोम प्रतिकृति और अस्थिरता की नियामक तंत्र elucidating के लिए एक उत्कृष्ट उपकरण है. यहाँ हम एक संशोधन के साथ पिछले Chiu में प्रकाशित रिपोर्ट पर आधारित प्रोटोकॉल का वर्णन<em&gt; एट अल.</em2008&gt;.

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Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

इस वीडियो में, हम माउस blastocysts के अलगाव और ट्रोफोब्लास्ट blastocysts से स्टेम कोशिकाओं की व्युत्पत्ति को प्रदर्शित करता है. हम भी स्टेम सेल संपत्ति के रखरखाव के रूप में के रूप में अच्छी तरह से संस्कृति में भेदभाव की प्रेरण के लिए शर्तों का वर्णन.

Blastocysts से माउस ट्रोफोब्लास्ट स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से hematopoietic स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Immunosurgery द्वारा व्युत्पत्ति

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

अलगाव और माउस भ्रूणीय कीटाणु कक्ष की व्युत्पत्ति

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

माउस आँखों से रेटिना स्टेम सेल के अलगाव

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

प्राथमिक माउस ट्रोफोब्लास्ट कोशिकाओं और ट्रोफोब्लास्ट आक्रमण परख के अलगाव

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

लघु अणु प्रेरण के साथ pluripotent मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से मानव कार्डिएक व्यापारियों और cardiomyocytes के कुशल व्युत्पत्ति

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से व्युत्पन्न चूहों की पीढ़ी

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Spermatogonial स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के सीरियल संवर्धन (SSCs) लंबी अवधि वयस्क माउस एसएससी लाइन्स की व्युत्पत्ति के लिए संस्कृति में

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mesenchymal संक्रमण के लिए प्रेरण और उपकला का विश्लेषण

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

वयस्क माउस छेनी से चिकित्सकीय उपकला स्टेम कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...