Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Gli autori ringraziano Janet Rossant per il protocollo originale. Questo studio è stato sostenuto dal National Institute of Health concedere CA106308 a WH.

In questo protocollo, si descrive la preparazione di blastocisti mouse e la creazione di linee cellulari TS. Manipolazioni del mouse generale prima della raccolta di blastocisti, tra cui il set-up per la monta naturale e l&#39;induzione dell&#39;ovulazione super, in fondo, il protocollo standard illustrato da Nagy et al. 2003 (pp146-150). Derivazione e il mantenimento delle cellule TS <ol><li> Setup croce riproduzione tra i topi di interesse. </li><li> Preparare fibroblasti embrio...

<ol>
	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

In questo video, dimostriamo il processo per la raccolta E3.5 blastocisti dalle procedure di uteri e sperimentali per stabilire linee di cellule TS. Abbiamo anche descrivere la condizione per mantenere la staminalità delle cellule TS e per indurre la loro differenziazione in cellule differenziate. A due passi fondamentali per ottenere linee cellulari puro TS sono i tempi per la disaggregazione escrescenza (punto 9) e la lavorazione del primo passaggio (passo 11). E &#39;stato riportato che endoderma primitivo cellule d...

Reagenti TS medio: RPMI-1640, FBS 20%, 1 piruvato di sodio mm, 100 mm beta-mercaptoetanolo e 100 mg / ml di penicillina-streptomicina. Mitomicina C: Sciogliere 2 mg di mitomicina C (Sigma M-0503) in 2 ml di PBS e aggiungere questa miscela 2 ml in 200 ml di mezzo di TS (10 ng / ml). Fare 20 aliquote (10 ml) e conservare a -20 ° C fino al momento dell&#39;uso. Aggiungere una aliquota per 100 piastra mm. Fibroblasti embrionali di topo-condizione medio (MEF-CM): Piastra MEF in 100 piastre mm (1 x 10 6 / piastra). Il giorno dopo, aggiungere 10 ml di medie TS per ogni piatto e continuare con la cultura per 48 ore. Raccogliere il terreno di coltura, filtrarli (0,45 mm) e conservare a -20 ° C in 35 aliquote da ml. Disgelo ciascuna aliquota quando necessario, che può essere conservato a 4 ° C. Il MEF può essere utilizzato per preparare due lotti più di CM prima che diventino confluenti. PBS / BSA: Sciogliere BSA, frazione V (Sigma A3311, 0,1% (w / v)) in PBS (10 ml), filtrare attraverso una siringa da 0,45 millimetri filtro e fare 1 aliquote ml in provette da 1,5 ml. Conservare a -70 ° C e scongelare un tubo quando necessario per prepararsi FGF4. FGF4 (1000x): Risospendere liofilizzato FGF4 (Sigma F8424, 25 mg) con 1 ml di PBS / BSA soluzione. Mescolare bene e fare 10 aliquote (100 ml) in provette da 1,5 ml e conservare a -70 ° C. Disgelo ogni tubo quando necessario e conservare le rimanenti a 4 ° C, non ricongelare. Diluire 1000 volte in media TS di ottenere 1x FGF4 (25 ng / ml). Eparina (1000x): Risospendere eparina (Sigma H3149, 10.000 unità) in PBS alla concentrazione finale di 1 mg / ml (1000x). Fai aliquote di 100 ml in provette da 1,5 ml e conservare a -70 ° C. Aliquote disgelo quando necessario e conservare le rimanenti a 4 ° C, non ricongelare. Diluire 1000 TS tempo medio per ottenere 1x eparina (1 ng / ml).

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

Specificazione del trophectoderm è uno degli eventi più antichi differenziazione di sviluppo dei mammiferi. Il lignaggio trofoblasto deriva dalla impianto trophectoderm media e genera la parte fetale della placenta. Di conseguenza, lo sviluppo di questo lignaggio è essenziale per la sopravvivenza dell&#39;embrione. Derivazione di staminali trofoblasto (TS), le cellule da blastocisti mouse è stato descritto per primo da Tanaka<em&gt; Et al.</em&gt; 1998. La capacità delle cellule TS per preservare la proprietà specifica trofoblasto e la loro espressione di stage e cellule di tipo-specifici marcatori dopo la stimolazione adeguata fornisce un sistema valido modello per studiare lo sviluppo lignaggio trofoblasto cui ricapitolando eventi placentazione presto. Inoltre, le cellule trofoblasto sono uno dei pochi tipi di cellule somatiche in fase di amplificazione del genoma naturale. Anche se le vie molecolari alla base poliploidizzazione trofoblasto hanno cominciato a svelare, il ruolo fisiologico e il vantaggio di amplificazione del genoma trofoblasto rimane in gran parte sfuggente. Lo sviluppo delle cellule staminali in cellule diploidi trofoblasto poliploidi in cultura fa di questo<em&gt; Ex vivo</emSistema di&gt; un ottimo strumento per chiarire il meccanismo di regolazione della replicazione del genoma e l&#39;instabilità nella salute e nella malattia. Qui si descrive un protocollo basato su precedenti rapporti con modificazioni pubblicato nel Chiu<em&gt; Et al.</em&gt; 2008.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

In questo video, dimostriamo l&#39;isolamento di blastocisti mouse e la derivazione di cellule staminali trofoblasto da blastocisti. Abbiamo anche descrivere le condizioni per il mantenimento della proprietà delle cellule staminali e l&#39;induzione della differenziazione nella cultura.

Derivazione di cellule staminali trofoblasto mouse da blastocisti

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivazione di cellule staminali ematopoietiche da cellule staminali embrionali murini

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Ricerca

Biologia

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivazione di cellule staminali embrionali umane da Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

L&#39;isolamento e la derivazione di cellule embrionali del mouse Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolamento di cellule staminali della retina dalla Eye mouse

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

Isolamento di cellule primarie trofoblasto mouse e Invasion Assay trofoblasto

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Derivazione efficiente dei diritti dell&#39;uomo e precursori cardiaci e cardiomiociti pluripotenti da cellule staminali embrionali umane con induzione piccole molecole

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generazione di topi derivati ​​da cellule staminali pluripotenti indotte

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Arricchimento di serie staminali spermatogoni e cellule progenitrici (SSC) in Cultura per la derivazione di lungo termine Lines topo adulto SSC

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induzione e Analisi dei epiteliale a Mesenchymal Transizione

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolamento e Cultura della Dental epiteliali cellule staminali del topo adulto Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...