Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

著者は、元のプロトコルのためにジャネットRossantに感謝。本研究では、WHの保健助成金CA106308の国立研究所によってサポートされていました。

このプロトコルでは、我々はマウス胚盤胞とTS細胞の樹立の準備について説明します。自然交配と超排卵の誘導のために設定を含む事前の胚盤胞のコレクションへの一般的なマウス操作では、、基本的にはナギらによって示される標準のプロトコルに従ってください。2003（pp146 - 150）。 TS細胞の派生とメンテナンス<ol><li>興味のマウスとの間のセットアッ?...

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	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

このビデオでは、我々は、TS細胞株を確立するために子宮や実験手順からE3.5胚盤胞を収集するプロセスを示しています。我々はまた、TS細胞のstemnessを維持し、分化した細胞への分化を誘導する条件について説明します。純粋なTS細胞株を取得する2つの重要なステップは、伸長の分解のためのタイミング（手順9）と初通過（ステップ11）処理です。それは、大規模な胚盤胞は、手順9または手?...

試薬 TS媒体： RPMI - 1640、20％FBS、1mMピルビン酸ナトリウム、100mMのβ-メルカプトエタノール、100 mg / mlのペニシリン - ストレプトマイシン。 マイトマイシンC： 2ミリリットルのPBSで2 mgをマイトマイシンC（シグマM - 0503）を溶解し、200ミリリットルのTS培地（10 ng / ml）の中にこの2mlの混合物を追加。使用するまで-20℃で20分注し（10ml）とストアを行います。 100 mmのプレートごとに一定量を追加。 マウス胚性線維芽細胞条件培地（MEF - CM）： 100 mmのプレート（1 × 10 6 /プレート）にプレートのMEF。翌日、皿当たり10mlのTS培地を追加し、48時間培養を続ける。それらをフィルタリング（0.45 mm）とを35mlのアリコートで-20℃で保存し、培養液を集める。 4℃で保存することができます必要に応じて各アリコート℃を解凍MEFのは、彼らがコンフルエントになる前に、CMの2つのバッチを準備するために使用することができます。 PBS / BSA： 0.45ミリメートルシリンジフィルターを通してフィルターPBS（10ml）に、のBSA、フラクションV（シグマA3311、0.1％（w / v）の）溶解し、1.5 mlチューブに1 mlのアリコートを行います。 -70℃で保存し、FGF4を準備するために必要な雪解けつのチューブを。 FGF4（1000X）： PBS / BSA溶液1 mlで再懸濁し凍結乾燥FGF4（シグマF8424、25mg）を。 -70℃でよく混ぜ合わせ、1.5 mlチューブ用と店舗に10アリコート（100ml）を加える℃に必要に応じて各チューブを融解し、4で、残りを保存° Cは、再凍結しないでください。 1X FGF4（25 ng / ml）を取得するためにTS培地で1000倍に希釈する。 ヘパリン（1000倍）。 1 mg / mLの（1000倍）の最終濃度にPBSで再懸濁し、ヘパリン（シグマH3149、1万台）。 -70℃で1.5 mlチューブや店舗に100 mlのアリコートを作る℃に雪解けのアリコートに必要と4で、残りを保存° Cは、再凍結しないでください。 1Xヘパリン（は1 ng / ml）を得るために、TS培地中に1000時間を希釈する。

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

栄養外胚葉の仕様は、哺乳類の発生の最も初期の分化のイベントの一つです。栄養外胚葉を仲介移植から派生し、絨毛の系統は、胎盤の胎児の一部を生成します。その結果、この系統の開発は、胚の生存に必須です。マウスの胚盤胞から栄養膜幹細胞（TS細胞）の導出は、最初に田中によって記述されていた<em&gt;ら。</em&gt; 1998。適切な刺激の後のステージと細胞タイプ特異的マーカーのトロホブラスト特定のプロパティとそれらの発現を維持するためにTS細胞の能力は、初期の胎盤形成のイベントをrecapitulatingにより栄養膜の系統の開発を調査する貴重なモデルシステムを提供します。さらに、栄養膜細胞は、天然のゲノム増幅を受けているいくつかの体細胞のタイプのいずれかです。栄養膜polyploidizationの根底にある分子経路が解明し始めているものの、栄養膜のゲノム増幅の生理的役割と利点は、主にとらえどころのないままです。文化における倍数体栄養膜細胞への二倍体性幹細胞の開発は、このしています<em&gt;生体外で</em&gt;システムの健康と疾患におけるゲノム複製と不安定性の調節機構を解明するための優れたツール。ここでは、チウに発表された変更と、以前の報告に基づいてプロトコルを記述する<em&gt;ら。</em&gt; 2008。

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Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

このビデオでは、我々はマウス胚盤胞と胚盤胞から栄養膜幹細胞の派生の分離を示しています。我々はまた、幹細胞のプロパティのメンテナンスだけでなく、文化の分化誘導のための条件について説明します。

胚盤胞からマウス栄養膜幹細胞の導出

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

マウス胚性幹細胞から造血幹細胞の導出

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

免疫手術でヒト胚性幹細胞の導出

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

マウスES胚細胞の単離と導出

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

マウスの眼から網膜幹細胞の単離

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

マウスの主栄養膜細胞と絨毛浸潤アッセイの分離

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

小分子の誘導と多能性ヒト胚性幹細胞からヒト心筋前駆体と心筋細胞の効率的な導出

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

人工多能性幹細胞に由来するマウスの作製

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

長期成体マウスのSSCラインの導出のために文化の精原幹細胞や前駆細胞の濃縮シリアル（SSCS）

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

間葉転換を誘導し、上皮の分析

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

成体マウス切歯から歯科上皮幹細胞の単離および培養

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...