Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
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저자는 원래 프로토콜 쟈넷 Rossant 감사합니다. 이 연구는 WH하는 보건 부여 CA106308 국립 연구소에 의해 지원되었다.

이 프로토콜에서는, 우리는 마우스 blastocysts의 준비와 TS 세포 라인의 설립에 대해 설명합니다. 이전 자연 교배에 설정하고 슈퍼 배란의 유도를 포함 blastocysts의 수집, 일반적인 마우스 조작은 기본적으로 나지 외 의해 설명된 표준 프로토콜을 따르십시오. 2003 (pp146 - 150). TS 세포의 유도 및 유지 보수 <ol><li> 관심 마우스 사이에 설치 사육 크로스. </li><li> 피더 세...

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	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

이 비디오에서는, 우리는 프로세스가 TS 세포 라인을 확립 uteri와 실험 절차에서 E3.5 blastocysts를 수집 보여줍니다. 또한 TS 세포의 stemness를 유지하고 차별화된 세포에 자신의 차별을 유발하는 조건을 설명합니다. 순수 TS 세포 라인을 얻기 위해 두 가지 중요한 단계는 가지의 disaggregation에 대한 타이밍 (9 단계)이며, 첫 번째 통로 (11 단계)를 처리. 그것은 광범위한 blastocyst 단계 11 (Kunath 외., 2005)에 TS ?...

시약 TS 매체 : RPMI - 1640, 20 % FBS, 1 ㎜의 나트륨 pyruvate, 100 MM 베타 - 메르 캅 토 에탄올 100 MG / ML 페니실린 - 스트렙토 마이신. Mitomycin C : 2 ML PBS 2 MG mitomycin C (시그마 M - 0503)을 디졸브 200 ML TS 매체 (10 NG / ML)로이 2 ML 혼합물을 추가합니다. 사용하기 전까지 -20 ° C 20 aliquots (10 ML)과 저장을합니다. 100mm 플레이트 당 한 나누어지는를 추가합니다. 마우스 배아 fibroblast - 조건 매체 (MEF - CM) : 100mm 접시에 플레이트 MEFs (1 × 10 6 / 플레이트). 다음날, 요리 당 10 ML TS 미디어를 추가하고 48 시간 동안 문화를 계속합니다. 그들을 필터 (0.45 ㎜) 35 ML의 aliquots에서 -20 ° C에서 저장, 문화 매체를 수집합니다. 4 저장할 수 있습니다 필요한 각 나누어지는 ° C.를 녹여 MEFs 그들이 합류되기 전에 CM 두 이상 일괄적으로 준비하는 데 사용할 수 있습니다. PBS / BSA : 0.45 mm 주사기 필터를 통해 필터 PBS (10 ML)에 BSA, 분수 V (시그마 A3311, 0.1 % (W / V)를) 디졸브와 1.5 ML 튜브 1 ML aliquots합니다. -70에서 보관 ° C와 FGF4을 준비하는 데 필요한 때 하나 튜브를 녹여. FGF4 (1000x) PBS / BSA 용액 1 ML과 Resuspend 동결 건조된 FGF4 (시그마 F8424, 25 MG). -70에서 잘 섞어 1.5 ML 튜브 및 저장소로 10 aliquots (100 ML)를 만들 ° C. 필요할 경우 각각의 튜브를 해동하고 4 나머지를 저장할 ° C는 다시 냉동하지 않습니다. 1X FGF4을 (25 NG / ML)을 구하는 TS 매체에서 1,000 회 희석. 헤파린 (1000x) 1 최종 농도로 PBS에 Resuspend 헤파린 (시그마 H3149, 10,000 단위) MG / ML (1000x). -70 1.5 ML 튜브와 가게에 100 ML aliquots 만들기 ° C. 해동의 aliquots 필요와 4 나머지를 저장할 ° C는 다시 냉동하지 않습니다. 1X 헤파린 (1 NG / ML)을 구하는 TS 매체 1000 시간을 희석.

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

trophectoderm의 사양은 포유류의 발전의 초기 분화 행사 중 하나입니다. trophectoderm의 mediates 주입에서 파생된 및 trophoblast의 일족이 태반의 태아 부분을 생성합니다. 결과적으로,이 혈통의 개발은 배아 생존을 위해 필수적입니다. 마우스 blastocysts에서 trophoblast 줄기 (TS) 세포의 유도 먼저 다나카에 의해 설명되었다<em&gt; 외.</em&gt; 1998. 적절한 자극 후 무대 및 세포 유형의 특정 마커의 trophoblast 특정 재산과 자신의 표현을 보존하기 위해 TS 세포의 능력은 초기 placentation 이벤트 recapitulating 떨어지던 trophoblast의 혈통 개발을 조사하기 위해 가치있는 모델 시스템을 제공합니다. 또한, trophoblast 세포는 자연 게놈 증폭을받은 몇 체세포 유형 중 하나입니다. trophoblast의 polyploidization를 기본 분자 경로가 해명되기 시작했지만, trophoblast의 게놈 증폭의 생리적 역할과 장점은 크게 어려운 남아 있습니다. 문화 polyploid trophoblast 세포에 diploid의 줄기 세포의 개발이 만들어<em&gt; 예 생체내</em건강과 질병의 게놈 복제 및 불안정성의 규제 메커니즘을 elucidating위한&gt; 시스템은 훌륭한 도구입니다. 여기 애기 출판 수정과 이전의 보고서를 기반으로 한 프로토콜을 설명<em&gt; 외.</em&gt; 2008.

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Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

이 비디오에서는, 우리는 마우스 blastocysts의 고립과 blastocysts에서 trophoblast의 줄기 세포의 유도를 보여줍니다. 우리는 또한 줄기 세포 속성의 유지 보수뿐만 아니라 문화에 분화의 유도에 대한 조건을 설명합니다.

Blastocysts에서 마우스 Trophoblast의 줄기 세포의 유도

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine 배아 줄기 세포로부터 조혈 줄기 세포의 유도

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

연구

생물학

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

절연 및 마우스 배아 새싹 세포의 유도

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

마우스 아이의 망막 줄기 세포의 분리

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

기본 마우스 Trophoblast 셀 및 Trophoblast의 침략 분석의 절연

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Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

작은 분자와 유도 Pluripotent 인간 배아 줄기 세포로부터 인간 심장 엽 성의 전구 물질과 Cardiomyocytes의 효율 유도

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

유도 만능의 줄기 세포에서 파생 마우스의 생성

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

장기 성인 마우스 SSC 라인의 유도를위한 문화 Spermatogonial 줄기 및 전구 세포의 일련 농축 (SSCs)

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

간엽 전환을 유도하고 상피의 분석

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

성인 마우스 앞니의 치아 상피 줄기 세포의 분리 및 문화

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...