Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Авторы выражают благодарность Джанет Rossant для оригинального протокола. Работа выполнена при поддержке Национального института здравоохранения грант CA106308 в WH.

В этом протоколе описываются подготовка мыши бластоцисты и создание линии TS клетки. Генеральный манипуляции мышью до коллекцию бластоцисты, в том числе созданы для естественного спаривания и индукция супер овуляции, в основном следовать стандартным протоколом иллюстрируется Надь ...

<ol>
	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

В этом видео, мы демонстрируем процесс сбора E3.5 бластоцист из матки и экспериментальные процедуры установления TS клеточных линий. Мы также описываем условие для поддержания stemness ТС клеток и вызвать их дифференцировку в дифференцированных клеток. Два важных шагов для получения чистой ...

Реагенты TS среды: RPMI-1640, 20% ЭТС, 1 мМ пирувата натрия, 100 ммоль бета-меркаптоэтанола и 100 мг / мл пенициллина, стрептомицина. Митомицин C: Растворите 2 мг митомицин С (Sigma M-0503) в 2 мл PBS и добавьте 2 мл смеси на 200 мл среды TS (10 нг / мл). Сделайте 20 аликвоты (10 мл) и хранить при температуре -20 ° С до использования. Добавьте одну аликвоту на 100 мм пластины. Мышиных эмбриональных фибробластов, состояние среды (MEF-CM): Пластина MEFs в 100 мм пластин (1 х 10 6 / пластины). На следующий день, добавить 10 мл TS среды на блюдо и продолжать культуры в течение 48 часов. Сбор культуральной среде, фильтровать их (0,45 мм) и хранить при -20 ° С в 35 мл порциями. Оттепель каждую аликвоту, когда это необходимо, которые могут храниться при температуре 4 ° C. MEFs могут быть использованы для подготовки в течение еще двух партий CM прежде чем они станут вырожденная. PBS / BSA: Растворите BSA, фракция V (Sigma A3311, 0,1% (м / о)) в PBS (10 мл), фильтруют через 0,45 мм шприц фильтр и сделать 1 мл аликвоты в 1,5 мл труб. Хранить при температуре -70 ° С и оттаивания одна трубка, когда это необходимо для подготовки FGF4. FGF4 (1000x): Ресуспендируют лиофилизированный FGF4 (Sigma F8424, 25 мг) с 1 мл PBS / BSA решение. Хорошо перемешать и сделать 10 аликвоты (100 мл) в 1,5 мл пробирки и хранят при температуре -70 ° C. Оттепель каждой пробирке, когда это необходимо и сохранить оставшиеся при 4 ° С, не замораживать повторно. Развести в 1000 раз в TS среда для получения 1x FGF4 (25 нг / мл). Гепарин (1000 раз): Ресуспендируют гепарин (Sigma H3149, 10000 единиц) в PBS в конечной концентрации 1 мг / мл (1000x). Сделать 100 мл аликвоты в 1,5 мл пробирки и хранят при температуре -70 ° C. Оттепель аликвоты, когда это необходимо и сохранить оставшиеся при 4 ° С, не замораживать повторно. Развести 1000 раз в среде TS получить 1x гепарин (1 нг / мл).

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

Спецификация трофэктодермы является одним из самых ранних событий дифференциации развития млекопитающих. Трофобласта линии происходит от имплантации трофэктодермы посредником и генерирует плода часть плаценты. В результате развития этой линии имеет важное значение для выживания эмбриона. Вывод трофобласта стволовых (TS) клеток из бластоцист мыши была впервые описана Танака<em&gt; Соавт.</em&gt; 1998 год. Способность TS клетки сохранить трофобласта конкретных собственности и их выражение стадии и типа клеток-специфических маркеров после соответствующей стимуляции обеспечивает полноценную систему модель для развития трофобласта линии которой сводный ранние события плацентации. Кроме того, клетки трофобласта являются одним из нескольких типов клеток соматической в ​​естественных усиления генома. Хотя молекулярных путей, лежащий в основе трофобласта полиплоидизации начали распутывать, физиологическая роль и преимущество трофобласта усиления генома во многом остается неуловимым. Развития диплоидных клеток стволовых полиплоидных клеток трофобласта в культуре делает это<em&gt; Исключая виво</em&gt; Система отличным инструментом для выяснения механизма регулирования репликации генома и нестабильности в норме и патологии. Здесь мы опишем протокол, основанный на предыдущих докладах с модификацией опубликованной в Чиу<em&gt; Соавт.</em&gt; 2008 год.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

В этом видео, мы демонстрируем изоляции мыши бластоцисты и вывод трофобласта стволовых клеток из бластоцист. Мы также описаны условия содержания имущества стволовых клеток, а также индукцию дифференциации в культуре.

Вывод Мышь трофобласта стволовых клеток из бластоцист

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Вывод гемопоэтических стволовых клеток мышей эмбриональных стволовых клеток

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Вывод человеческих эмбриональных стволовых клеток на применение специфических иммунных сывороток в хирургии

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Выделение и Вывод мышиных эмбриональных зародышевых клеток

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Выделение стволовых клеток сетчатки от мыши глаз

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

Изоляция первичной мышь клетки трофобласта и анализа трофобласта Вторжение

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Эффективное Вывод прав Сердечная Прекурсоры и кардиомиоциты из плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток человека с малыми Индукционная Молекула

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Генерация Мыши, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Серийный обогащению сперматогониальные стволовых и клеток-предшественников (SSC) в культуре Вывод Долгосрочные взрослых мышей линии Юг-Юг

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Индукционные и анализ эпителиальных к мезенхимальных перехода

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Выделение и Культура Стоматологическая эпителиальных стволовых клеток из взрослых мышей резца

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...