Name: derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts
Uploaded: 2010-06-08T17:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Yazarlar Janet Rossant orijinal protokol için teşekkür ederiz. Bu çalışma Ulusal Sağlık hibe CA106308 WH Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

Bu protokol, fare blastosist hazırlanması ve TS hücre hatlarının kurulması açıklanmaktadır. Doğal çiftleşme için set ve süper ovulasyon indüksiyon dahil olmak üzere blastosist koleksiyon, önce Genel fare manipülasyonlar temelde Nagy ve ark tarafından gösterilen standart bir protokol izleyin. 2003 (pp146 150). TS hücrelerinin türetilmesi ve bakım <ol><li> Kur, faiz fareler arasında üreme çapraz. </li><li> Besleyici hücreler olarak fare embriyonik...

<ol>
	<li>Chiu, S. Y., Asai, N., Costantini, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hsu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-specific+protease+2+is+essential+for+modulating+p53-Mdm2+in+development+of+trophoblast+stem+cell+niches+and+lineages.">SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.</a> PLoS Biol. 6, E310-E310 (2008).</li><li>Kunath, T., Arnaud, D., Uy, D. G., Okamoto, I., Chureau, C., Yamanaka, Y., Heard, E., Gardner, R. L., Avner, P., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+X-inactivation+in+extra-embryonic+endoderm+cell+lines+from+mouse+blastocysts.">Imprinted X-inactivation in extra-embryonic endoderm cell lines from mouse blastocysts.</a> Development. 132, 1649-1661 (2005).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: The Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Tanaka, S., Kunath, T., Hadjantonakis, A. K., Nagy, A., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+trophoblast+stem+cell+proliferation+by+FGF4.">Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF4.</a> Science. 282, 2072-2075 (1998).</li></ol>

Bu videoda, biz süreci TS hücre hatları kurmak için uteri ve deneysel prosedürleri E3.5 blastosist toplamak göstermektedir. Ayrıca stemness TS hücreleri korumak ve farklılaşmış hücrelerine farklılaşma ikna etmek için durumu açıklar. Saf TS hücre hatları elde etmek için iki kritik adımlar akıbet ayrıştırılmasıyla için zamanlama (adım 9) ve ilk geçiş işleme (adım 11). Bu geniş blastosist adım 11 (Kunath ve ark, 2005) TS kolonilerin adım 9 ya da aşırı çoğalma (&gt;% 50 confluency) ...

Reaktifler TS orta: RPMI-1640,% 20 FBS, 1 mM sodyum piruvat, 100 mM beta-merkaptoetanol ve 100 mg / ml penisilin-streptomisin. Mitomisin C: 2 mg mitomisin C (Sigma M-0503) 2 ml PBS içinde çözülür ve 200 ml TS orta (10 ng / ml) 2 ml içine bu karışımı ekleyin. Kullanana kadar -20 ° C&#39;de 20 alikotları (10 ml) ve mağaza olun. 100 mm plaka başına bir kısım ekleyin. Fare embriyonik fibroblast koşul orta (MEF-CM): 100 mm plakalar Levha MEFS (1 x 10 6 / plaka). Ertesi gün başına 10 ml TS çanak orta ekleyin ve 48 saat boyunca kültür devam ediyor. Bunları filtre (0.45 mm) ve 35 ml alikotları -20 ° C&#39;de mağaza, kültür ortamı toplayın. 4 saklanabilir gerekli her kısım ° C çözülme MEFS konfluent haline gelmeden CM iki veya daha fazla partiler için hazırlamak için kullanılabilir. PBS / BSA: 0.45 mm şırınga filtresi ile filtre PBS (10 ml), BSA, fraksiyon V (Sigma A3311,% 0,1 (w / v)) çözülür ve 1 ml 1,5 ml tüpler alikotları yapmak. Mağaza -70 ° C ve FGF4 hazırlamak için gerekli zaman bir tüp Çözülme. FGF4 (1000x): 1 ml PBS / BSA çözüm ile yeniden süspanse liyofilize FGF4 (Sigma F8424, 25 mg). -70 Iyice karıştırınız ve 1.5 ml tüpler ve depoya 10 alikotları (100 ml) ° C Gerektiğinde her tüp çözülme ve saklamak kalan 4 ° C, tekrar dondurmak yok. 1x FGF4 (25 ng / ml) elde etmek için, TS orta 1000 kat sulandırınız. Heparin (1000x): 1 nihai konsantrasyonu PBS içinde süspanse edin heparin (Sigma H3149, 10.000 adet) mg / ml (1000x). 1.5 ml tüpler ve mağaza içine 100 ml alikotları olun -70 ° C Çözülme alikotları ve kalan 4 saklamak ° C, yeniden dondurucu yoktur. 1x heparin (1 ng / ml) elde etmek için, TS orta 1000 kez sulandırınız.

derivation of mouse trophoblast stem cells from blastocysts

Trophectoderm belirlenmesi memeli gelişiminin erken farklılaşma olayları biridir. Trophectoderm aracılık implantasyon türetilmiştir ve plasentanın fetal trofoblast soy üretir. Sonuç olarak, bu soy gelişimi embriyonun hayatta kalmak için çok önemlidir. Fare blastosist trofoblast kök (TS) hücreleri türetilmesi ilk Tanaka tarafından tarif edilmiştir<em&gt; Ve ark.</em&gt; 1998. Uygun stimülasyon sonra sahne ve hücre tipi özel işaretleri trofoblast özel mülkiyet ve anlatım TS hücreleri korumak için yeteneği erken plasenta olayları yansıtan sayede trofoblast soy geliştirme araştırmak için değerli bir model sistem sunmaktadır. Ayrıca, trofoblast hücrelerinin doğal genom amplifikasyon geçiren birkaç somatik hücre tipleri biri. Trofoblast polyploidization altında yatan moleküler yollar çözülmeye başlamış olmasına rağmen, trofoblast genom amplifikasyon fizyolojik rolü ve avantajı büyük ölçüde zor kalır. Kültür polyploid trofoblast hücreleri diploid kök hücre gelişimi bu<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sistem, sağlık ve hastalık, genom replikasyonu ve istikrarsızlık düzenleyici bir mekanizma nedenlerine açıklık için mükemmel bir araç. Burada Chiu yılında yayımlanan değişiklik ile önceki raporlara göre bir protokol<em&gt; Ve ark.</em&gt; 2008.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts at JoVE.com

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Bu video, fare blastosist blastosist trofoblast kök hücrelerinin izolasyonu ve derivasyon göstermektedir. Ayrıca kök hücre özelliği yanı sıra kültür farklılaşma indüksiyonu için bakım koşulları açıklar.

Blastosist Fare trofoblast Kök Hücre türetilmesi

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murin Embriyonik Kök Hücre Hematopoetik Kök Hücre türetilmesi

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Fare Embriyonik Germinal Hücreleri İzolasyon ve türetilmesi

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Fare Göz Retina Kök Hücre İzolasyonu

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

Birincil Fare trofoblast hücreleri ve trofoblast invazyonu Assay İzolasyonu

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Kardiyak Öncüleri ve kardiyomiyositlerde Verimli türetilmesi

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Uzun vadeli Yetişkin Fare SSC Hatları türetilmesi için Kültür Spermatogonial Kök ve progenitör hücrelerin Seri Zenginleştirme (DGM)

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...