Name: in situ quantification of pancreatic beta-cell mass in mice
Uploaded: 2010-06-07T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice at JoVE.com

Lo studio è supportato da US Public Health Service Concessione DK-081527, 072473 e DK-DK-20595 per l&#39;Università di Chicago Diabetes Centro di Ricerca e Formazione (Animal Models core), e un dono da parte della Fondazione Famiglia Kovler.

Parte 1: Preparazione dei campioni <ol><li> Posizionare il mouse al microscopio dissezione, rimuovere l&#39;intero pancreas con il duodeno e la milza ancora attaccato, e posizionare gli organi su un vetrino pre-pesati. Rimuovere il duodeno, tagliando il suo tessuto connettivo lungo il lato dove è legato al pancreas. Tagliare e rimuovere il grasso in eccesso milza e il pancreas fino a quando il pancreas è completamente isolato nella diapositiva. (Grasso del pancreas è riconoscibile per il colore bianco, come differe...

<ol>
	<li>Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+formation+during+the+neonatal+development+in+mice.">Islet formation during the neonatal development in mice.</a> PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).</li><li>Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+pancreatic+islet+distribution+in+situ+in+mice.">Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).</li><li>Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+green+fluorescent+protein-labeled+pancreatic+beta+-cells.">Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).</li><li>Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pancreatic+beta-cells+in+the+intact+pancreas.">Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).</li></ol>

L&#39;analisi delle immagini fetta virtuale di isole e cellule beta nel pancreas cluster intatto offre una grande vista l&#39;intera distribuzione delle isolette. Sviluppi e cambiamenti nella distribuzione delle isole totale nel corso del tempo può quindi essere studiati e confrontati. Un esempio è dimostrato nella nostra analisi della formazione di isole pancreatiche (1). Un analisi completa delle neonatale pancreas topi in vari momenti (P1-P21) ha dimostrato che le isole sono formate da fissione. Mentre il beta-prol...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>14001-13</td>
<td>01n2</td>
</tr>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>14072-10</td>
<td>02s5	</td>
</tr>
<tr>
<td>Large glass slide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>71862-01</td>
<td>75x51x1.2mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Large cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ted Pella, Inc</td>
<td>260462</td>
<td>50x75mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Glass Slide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-550-15</td>
<td>25x75x1.0mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-458-5M</td>
<td>75x25mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Erie Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>25mm circle</td>
</tr>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus IX-81</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissection microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus SZX12</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereo Investigator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MicroBrightField</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MIP-GFP mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratory</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in situ quantification of pancreatic beta-cell mass in mice

Tracing cambiamenti di popolazioni di cellule specifiche in materia di salute e malattia è un obiettivo importante della ricerca biomedica. Il processo di monitoraggio pancreatiche beta-proliferazione delle cellule e la crescita delle isole è particolarmente impegnativo. Abbiamo sviluppato un metodo per catturare la distribuzione delle beta-cellule del pancreas intatto di topi transgenici con fluorescenza tag beta-cellule con una macro scritta per ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). In seguito a dissezione del pancreas e di compensazione dei tessuti, il pancreas intero è catturata come una fetta virtuale, dopo di che la GFP-tagged beta-cellule sono esaminati. L&#39;analisi include la quantificazione del totale delle cellule beta zona, il numero di isole pancreatiche e distribuzione delle dimensioni con riferimento a parametri specifici e le posizioni per ogni isola e per piccoli gruppi di beta-cellule. L&#39;intera distribuzione delle isole possono essere tracciati in tre dimensioni, e le informazioni dalla distribuzione delle dimensioni e della forma di ogni isolotto consente un confronto quantitativo e qualitativo dei cambiamenti nella complessiva delle cellule beta zona a colpo d&#39;occhio.

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In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

Il protocollo seguente delinea il processo di dissezione del pancreas per l&#39;imaging fetta virtuale, e la successiva quantificazione di tutte le GFP-tagged beta-cellule del pancreas intero.

Quantificazione in situ di cellule beta pancreatiche Messa in topi

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