Name: analysis of gene expression in emerald ash borer (agrilus planipennis) using quantitative real time-pcr
Uploaded: 2010-05-04T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR at JoVE.com

Nous reconnaissons l&#39;aide fournie par Lourdes Delta Antequera Arrueta (département d&#39;entomologie, Université Ohio State / OARDC, Wooster, OH) dans la configuration de l&#39;expérimentation. Nous remercions le Dr Thérèse Pologne (USDA, Forest Services, ORA) pour envoyer des échantillons EAB larvaire. Aide fournie par le Dr Luis Un Canas et Nuris M Acosta avec la configuration de microscope est apprécié. Le financement de ce projet a été assuré par des fonds d&#39;État et fédéraux affectés au Centre de l&#39;Ohio Agricultural Research and Development, The Ohio State University.

Le protocole complet avec les différentes étapes est représenté dans l&#39;organigramme de la figure 1. Étapes individuelles constituant dissection, extraction d&#39;ARN, synthèse du premier brin d&#39;ADNc et QRT-PCR sont détaillées ci-dessous. I. Dissection des larves <ol><li> Avant le début de cette procédure, l&#39;agrile du frêne émeraude lieu, ou l&#39;agrile du frêne, de larves sur du papier absorbant humide jusqu&#39;à ce que les dissections sont réalisées. Gardez f...

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	<li>Lehane, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritrophic+matrix+structure+and+function.">Peritrophic matrix structure and function.</a> Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).</li><li>Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cDNA+cloning+and+transcriptional+expression+of+a+peritrophin-like+gene+in+the+Hessian+fly,+Mayetiola+destructor+[Say].">cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola destructor [Say].</a> Arc of Insect Bio. 64, 19-29 (2007).</li><li>Pauchet, Y., Wilkinson, P., van Munster, M., Augustin, S., Pauron, D., ffrench-Constant, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrosequencing+of+the+midgut+transcriptome+of+the+poplar+leaf+beetle+Chrysomela+tremulae+reveals+new+gene+families+in+Coleoptera.+Ins+Bio+and+Mol.">Pyrosequencing of the midgut transcriptome of the poplar leaf beetle Chrysomela tremulae reveals new gene families in Coleoptera. Ins Bio and Mol.</a> 39, 403-413 (2009).</li><li>Pfaffl, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, 2002-2007 (2001).</li><li>Tellam, R. L., Lehane, M. J., Billingsley, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of the Insect Midgut. , 86-114 (1996).</li></ol>

Les cycles de seuil (Ct) valeur est obtenue pour chaque échantillon dans la plaque qRT-PCR. Pour faire la courbe standard, la valeur de Ct obtenues pour chaque dilution a été comploté contre le journal de sa concentration. Les valeurs de Ct pour les échantillons expérimentaux ont ensuite été reportées sur cette courbe standard de dilution en série. Quantités cibles ont été calculés à partir de différentes courbes standard généré pour chaque tissu soit expérimentation et d&#39;expression du développe...

analysis of gene expression in emerald ash borer (agrilus planipennis) using quantitative real time-pcr

L&#39;agrile du frêne (AF,<em&gt; Agrilus planipennis</em&gt;) Est un ravageur exotique envahissante, qui a tué des millions de frênes (<em&gt; Fraxinus</em&gt; Spp) en Amérique du Nord.<strong&gt;</strong&gt; L&#39;agrile du frêne continue à se propager rapidement et les attaques des cendres des arbres d&#39;âges différents, de jeunes arbres à des arbres matures. Toutefois, à ce jour très peu ou pas de connaissances moléculaires existe pour l&#39;agrile du frêne. Nous sommes intéressés à déchiffrer les mécanismes moléculaires à base physiologique au niveau des tissus que l&#39;agrile du frêne aide à la colonisation réussie de frênes. Dans ce rapport, nous montrons l&#39;utilisation efficace de méthodes quantitatives en temps réel de PCR (qRT-PCR) pour déterminer les niveaux d&#39;ARNm dans différents tissus larvaires (y compris l&#39;intestin moyen, gras corps et cuticule) et les différents stades de développement (dont 1<sup&gt; Er</sup&gt; -, 2<sup&gt; Nd</sup&gt; -, 3<sup&gt; Rd</sup&gt; -, 4<sup&gt; E</sup&gt;-Stades, prénymphes et adultes) de l&#39;agrile du frêne. À titre d&#39;exemple, un gène peritrophin (ci-après nommée,<em&gt; AP-PERI1</em&gt;) Est illustré comme le gène d&#39;intérêt et une protéine ribosomique (<em&gt; AP-RP1</em&gt;) Que le contrôle interne. Peritrophins sont des composantes importantes de la membrane péritrophique / matrice (PM), qui est la doublure de l&#39;intestin de l&#39;insecte. Le PM a différentes fonctions, dont la digestion et la protection mécanique de la épithélium de l&#39;intestin.

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Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR

Quantitative PCR en temps réel (qRT-PCR) est un outil efficace pour diagnostiquer les niveaux d&#39;ARNm dans les tissus des insectes et des stades de développement. Dans ce rapport, nous montrons l&#39;utilisation de qRT-PCR pour déterminer les niveaux d&#39;ARNm dans différents tissus des larves et les stades de développement de l&#39;espèce d&#39;insecte invasif, l&#39;agrile du frêne.

Analyse de l&#39;expression génique dans l&#39;agrile du frêne ( Agrilus planipennis) En utilisant quantitative en temps réel-PCR

Emerald ash borer (EAB, Agrilus planipennis) is an exotic invasive pest, which has killed millions of ash trees (Fraxinus spp) in North America. EAB ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer (Agrilus planipennis) Using Quantitative Real Time-PCR

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

Analyse bactérienne expression génique par puces à ADN

Recherche

Biologie

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

La préparation des cultures primaires de cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse murine pour l&#39;électroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform

Mondial Analyse expression génique utilisant une plateforme biopuces oligonucléotidiques Zebrafish

Gene microarray technology permits quantitative measurement and gene expression profiling of transcript levels on a genome-wide basis. Gene microarray ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Utilisation du système d&#39;électroporation Gene Pulser MXcell à transfecter des cellules primaires à haut rendement

Quantitative Real-Time PCR using the Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Quantitative PCR en temps réel utilisant le Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

The Solaris qPCR Gene Expression Assay is a novel type of primer/probe set, designed to simplify the qPCR process while maintaining the sensitivity and ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Aide d&#39;un compteur de cellules automatisé pour simplifier les études d&#39;expression génique: Knockdown siRNA de l&#39;IL-4 dans l&#39;expression des gènes dépendant cellules Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR (qPCR) Arrays

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR qPCR Arrays

Profilage de la pré-micro ARNs et micro-ARN en utilisant quantitative PCR en temps réel (qPCR) Arrays

Quantitative real-time PCR (QPCR) has emerged as an accurate and valuable tool in profiling gene expression levels.  One of its many advantages is a lower ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Détermination des profils d&#39;expression génétique dans les C. elegans Utilisation microréseaux et PCR en temps réel

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

La reconstitution in vitro de l&#39;actif T. La télomérase castaneum

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisation et d&#39;analyse de molécules d&#39;ARNm par fluorescence<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridation dans<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...