Name: analysis of gene expression in emerald ash borer (agrilus planipennis) using quantitative real time-pcr
Uploaded: 2010-05-04T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR at JoVE.com

我々は、実験のセットアップでルルドデルタArruetaアンテケラ（昆虫学科、オハイオ州立大学/ OARDC、ウースター、オハイオ州）が提供するヘルプを認めます。我々は、EAB幼虫のサンプルを送るための博士テレーズポーランドを（USDA、森林サービス、NRS）感謝。顕微鏡のセットアップが認識されているとDr。ルイスカナスとNuris Mアコスタが提供するのに役立ちます。このプロジェクトの資金は、オハイオ農業研究開発センター、オハイオ州立大学に充当州と連邦資金によって提供されていました。

別のステップで完全なプロトコルは、図1のフローチャートに示されている。解剖を構成する個々のステップは、RNA抽出、ファーストストランドcDNA合成や定量RT - PCRは以下に詳述する。 I.幼虫の解剖<ol><li>この手順の開始時、代わりにエメラルド灰ボーラー、またはEAB、湿ったティッシュペーパーで幼虫の前に解剖が行われるまで。新しく調製した1Xリン酸塩は解剖を通?...

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	<li>Lehane, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritrophic+matrix+structure+and+function.">Peritrophic matrix structure and function.</a> Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).</li><li>Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cDNA+cloning+and+transcriptional+expression+of+a+peritrophin-like+gene+in+the+Hessian+fly,+Mayetiola+destructor+[Say].">cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola destructor [Say].</a> Arc of Insect Bio. 64, 19-29 (2007).</li><li>Pauchet, Y., Wilkinson, P., van Munster, M., Augustin, S., Pauron, D., ffrench-Constant, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrosequencing+of+the+midgut+transcriptome+of+the+poplar+leaf+beetle+Chrysomela+tremulae+reveals+new+gene+families+in+Coleoptera.+Ins+Bio+and+Mol.">Pyrosequencing of the midgut transcriptome of the poplar leaf beetle Chrysomela tremulae reveals new gene families in Coleoptera. Ins Bio and Mol.</a> 39, 403-413 (2009).</li><li>Pfaffl, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, 2002-2007 (2001).</li><li>Tellam, R. L., Lehane, M. J., Billingsley, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of the Insect Midgut. , 86-114 (1996).</li></ol>

閾値サイクル（Ct値）の値は、定量RT - PCRプレートに各サンプルについて得られる。標準曲線を作成するために、各希釈液について得られたCt値は、その濃度の対数に対してプロットした。実験サンプルのCt値は、この希釈系列の標準曲線にプロットした。目標量は、それぞれの実験、すなわち組織や発生過程での発現用に生成された別々の標準曲線から計算した。相対式の値は、（回転）し?...

analysis of gene expression in emerald ash borer (agrilus planipennis) using quantitative real time-pcr

エメラルド灰のボーラー（EAB、<em&gt; Agrilus planipennis</em&gt;）灰の木々の何百万人を殺してエキゾチックな侵襲的な害虫であり、（<em&gt;アオダモ</em北米で&gt;属）。<strong&gt;</strong&gt; EABは、急速に普及し続け、成熟した木々の苗木から、さまざまな年齢の灰の木を攻撃する。しかし、非常にほとんど、あるいはまったく分子知識がEABのために存在する日付に。私たちは、灰の木々の成功した植民地化の援助のEABという組織レベルでの分子ベースの生理学的プロセスを解読することに興味がある。本報告書では、別の幼虫組織における把握するmRNAのレベルまで定量的リアルタイムPCR（定量RT - PCR）（中腸、脂肪体とキューティクルを含む）と1を含むさまざまな発達段階（の効果的な使用方法を示して<sup&gt; ST</sup&gt; - 、2<sup&gt; ND</sup&gt; - 、3<sup&gt; RD</sup&gt; - 、4<sup&gt;目</supEABの&gt; -齢期、prepupaeと大人）。例として、peritrophinの遺伝子（ここに名前、<em&gt; AP - PERI1</em&gt;）は、目的の遺伝子とリボソームタンパク質（のように例示されている<em&gt; AP - RP1</em&gt;）内部統制として。 Peritrophinsは昆虫腸の粘膜であるperitrophic膜/マトリクス（PM）、の重要なコンポーネントです。 PMは、消化と腸上皮への機械的保護を含む多様な機能を備えています。

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Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR

定量リアルタイムPCR（定量RT - PCR）が異なる昆虫の組織と発達段階にmRNAレベルを診断する有効なツールです。このレポートでは、異なる幼虫の組織や侵襲的な昆虫種の発達段階で把握するmRNAのレベルまで定量RT - PCRの使用、エメラルド灰ボーラーを示す。

エメラルドアッシュボーラーの遺伝子発現の解析（ Agrilus planipennis）を使用して定量的リアルタイム- PCR

Emerald ash borer (EAB, Agrilus planipennis) is an exotic invasive pest, which has killed millions of ash trees (Fraxinus spp) in North America. EAB ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer (Agrilus planipennis) Using Quantitative Real Time-PCR

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

マイクロアレイを用いた細菌の遺伝子発現解析

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

エレクトロポレーションのためのマウス骨髄からの一次造血細胞培養の準備

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform

ゼブラフィッシュオリゴヌクレオチドのマイクロアレイプラットフォームを使用してグローバルな遺伝子発現解析

Gene microarray technology permits quantitative measurement and gene expression profiling of transcript levels on a genome-wide basis. Gene microarray ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

高効率で初代培養細胞をトランスフェクトするためにジーンパルサーMXcellのエレクトロポレーションシステムの使用

Quantitative Real-Time PCR using the Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

サーモサイエンティフィックのSolaris定量PCRアッセイを用いて定量的リアルタイムPCR

The Solaris qPCR Gene Expression Assay is a novel type of primer/probe set, designed to simplify the qPCR process while maintaining the sensitivity and ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

ナマルバ細胞におけるIL - 4依存性遺伝子発現のsiRNAのノックダウン：遺伝子発現研究を簡素化する自動化セルカウンターの使い方

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR (qPCR) Arrays

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR qPCR Arrays

定量リアルタイムPCR（定量PCR）アレイを用いたプレマイクロRNAとマイクロRNAのプロファイリング

Quantitative real-time PCR (QPCR) has emerged as an accurate and valuable tool in profiling gene expression levels.  One of its many advantages is a lower ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

で遺伝子発現プロファイルを決定 C.エレガンスマイクロアレイとリアルタイムPCRを用いて

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

アクティブT.の試験管内再構成でcastaneumのテロメラーゼ

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

蛍光を用いたmRNA分子の可視化と分析<em&gt;その場で</emで&gt;ハイブリダイゼーション<em&gt;サッカロミセス·セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...