Name: analysis of gene expression in emerald ash borer (agrilus planipennis) using quantitative real time-pcr
Uploaded: 2010-05-04T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR at JoVE.com

Мы признаем, помощь, оказанную при Лурдес Delta Arrueta Антекера (кафедра энтомологии Университета штата Огайо / OARDC, Вустер, штат Огайо) в настройке экспериментов. Мы благодарим доктора Терезы Польша (USDA, лесных служб, NRS) для отправки EAB личиночной образцов. Помощь при условии, д-р Луис Канас и Nuris М Акоста с микроскопом установки приветствуется. Финансирование этого проекта была оказана со стороны государства и Федеральной средств, ассигнованных в Огайо сельскохозяйственных исследований и развития центра, университета штата Огайо.

Полный протокол с разными шагами изображена на блок-схеме на рисунке 1. Отдельные этапы, составляющие рассечение, РНК добычи, первой цепи кДНК синтеза и QRT-PCR подробно описаны ниже. И. личинок Dissection <ol><li> До начала этой процедуры, место Изумрудный золы буром или EAB, личинки ?...

<ol>
	<li>Lehane, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritrophic+matrix+structure+and+function.">Peritrophic matrix structure and function.</a> Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).</li><li>Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cDNA+cloning+and+transcriptional+expression+of+a+peritrophin-like+gene+in+the+Hessian+fly,+Mayetiola+destructor+[Say].">cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola destructor [Say].</a> Arc of Insect Bio. 64, 19-29 (2007).</li><li>Pauchet, Y., Wilkinson, P., van Munster, M., Augustin, S., Pauron, D., ffrench-Constant, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrosequencing+of+the+midgut+transcriptome+of+the+poplar+leaf+beetle+Chrysomela+tremulae+reveals+new+gene+families+in+Coleoptera.+Ins+Bio+and+Mol.">Pyrosequencing of the midgut transcriptome of the poplar leaf beetle Chrysomela tremulae reveals new gene families in Coleoptera. Ins Bio and Mol.</a> 39, 403-413 (2009).</li><li>Pfaffl, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, 2002-2007 (2001).</li><li>Tellam, R. L., Lehane, M. J., Billingsley, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of the Insect Midgut. , 86-114 (1996).</li></ol>

Порога циклов (Ct) значения, полученные для каждого образца в QRT-PCR пластины. Для приготовления стандартной кривой, значение Ct, полученных для каждого разведения был заговор против журнала его концентрации. Ct значения для экспериментальных образцов были затем построены на этой стандартн...

analysis of gene expression in emerald ash borer (agrilus planipennis) using quantitative real time-pcr

Изумрудный золы буром (EAB,<em&gt; Agrilus planipennis</em&gt;) Является экзотических инвазивных вредителями, который убил миллионы ясень (<em&gt; Fraxinus</em&gt; SPP) в Северной Америке.<strong&gt;</strong&gt; EAB продолжает быстро распространяться и нападения золы деревьев разных возрастов, от саженцев до взрослых деревьев. Однако на сегодняшний день очень мало или вообще не знание молекулярной существует для EAB. Мы заинтересованы в расшифровке молекулярной основе физиологических процессов на тканевом уровне, что помощь EAB в успешной колонизации ясень. В этом отчете мы показываем эффективного использования количественного ПЦР в реальном времени (QRT-PCR) для определения уровня мРНК в разных личиночных тканей (в том числе средней кишки, жир тела и кутикулой) и различных стадий развития (в том числе 1<sup&gt; Й</sup&gt; -, 2<sup&gt; Й</sup&gt; -, 3<sup&gt; Й</sup&gt; -, 4<sup&gt; Й</sup&gt;-Возрастов, предкуколок и взрослых) из EAB. Например, ген peritrophin (здесь назван,<em&gt; AP-PERI1</em&gt;) Является примером, как ген интереса и рибосомных белков (<em&gt; AP-RP1</em&gt;) В качестве внутреннего контроля. Peritrophins являются важными компонентами мембран перитрофической / матрицы (ПМ), который является прокладка насекомых кишечнике. PM обладает разнообразными функциями, включая пищеварение и механическую защиту, чтобы кишки эпителия.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR at JoVE.com

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR

Количественный ПЦР в реальном времени (QRT-PCR) является эффективным инструментом для диагностики мРНК в разных тканях насекомого и стадии развития. В этом отчете мы показываем использование QRT-PCR установить уровни мРНК в разных тканей личинки и стадии развития инвазивных видов насекомых, изумруд золы буром.

Анализ экспрессии генов в Борер Изумрудный Эш ( Agrilus planipennis) С использованием количественных Real Time PCR-

Emerald ash borer (EAB, Agrilus planipennis) is an exotic invasive pest, which has killed millions of ash trees (Fraxinus spp) in North America. EAB ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer (Agrilus planipennis) Using Quantitative Real Time-PCR

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

Бактериальный анализ экспрессии генов Использование Microarrays

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Подготовка первичных гемопоэтических клеточных культур из костного мозга мышей для Электропорация

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform

Глобальный анализ экспрессии генов Использование данио рерио Платформа Microarray олигонуклеотидов

Gene microarray technology permits quantitative measurement and gene expression profiling of transcript levels on a genome-wide basis. Gene microarray ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Использование генной Pulser MXcell Электропорация системы для трансфекции первичных элементов с высоким КПД

Quantitative Real-Time PCR using the Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Количественный ПЦР в реальном времени использованием Thermo Scientific Solaris КПЦР Пробирной

The Solaris qPCR Gene Expression Assay is a novel type of primer/probe set, designed to simplify the qPCR process while maintaining the sensitivity and ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Использование автоматизированных счетчиков сотовый для упрощения исследования экспрессии генов: миРНК Нокдаун ИЛ-4 зависимости экспрессии генов в клетках Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR (qPCR) Arrays

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR qPCR Arrays

Профилирование Предварительно микро-РНК и микроРНК с использованием количественных ПЦР в реальном времени (КПЦР) Массивы

Quantitative real-time PCR (QPCR) has emerged as an accurate and valuable tool in profiling gene expression levels.  One of its many advantages is a lower ...

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Определение генетических профилей выражения в С. Элеганс Использование Microarray и ПЦР в реальном времени

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

В пробирке восстановление активность Т. castaneum Теломераза

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Визуализации и анализа молекул мРНК с помощью флуоресцентной<em&gt; В Ситу</em&gt; Гибридизация в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...