Name: labeling and imaging cells in the zebrafish hindbrain
Uploaded: 2010-07-25T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענק NIH הוענק ר ברוסטר (1R01GM085290-01A1).

1.Microinjection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדולל פלסמיד קידוד קרום במיקוד גרין פלורסנט חלבון (mGFP, באדיבות ריצ&#39;רד הרלנד) כדי בריכוז של 40 ng / ml. DNA הוא הוכן על ידי linearizing פלסמיד (mGFP/PCS2 +, באדיבות ריצ&#39;רד הרלנד) מטוהרים באמצעות ערכת הכנה Qiagen מקסי. תוספת של פ?...

<ol>
	<li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish Practical approach series. , (2002).</li><li>Hong, E., Brewster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-cadherin+is+required+for+the+polarized+cell+behaviors+that+drive+neurulation+in+the+zebrafish.">N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish.</a> Development. 133, 3895-3905 (2006).</li><li>Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Cell+Motility+and+Actin+Cytoskeleton+of+Individual+Neurons+and+Neural+Crest+Cells+in+Zebrafish+Embryos.">Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

לסיכום, שיטות תיוג המתוארת כאן לאפשר לניתוח תא בודד של תהליכים המוךפו&quot;גנטי שהולך בעובר דג הזברה. הדגש העיקרי של פרוטוקול זה הוא על שיטות דימות תאים שכותרתו בצינור העצבי באמצעות mGFP בשליטת היזם בכל מקום. עבור יישומים נוספים של הקוראים זה assay חולף ביטוי לעיין במאמר לא?...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=1976">Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain</a>. There was an error in the authors affiliations. The authors have been corrected to:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1 1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County 2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2 1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center 2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County

A correction to the author affiliations has been made for the article Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain.

Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain

פתרונות <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האנק של צילומים מס &#39;1: 8.0 גרם NaCl, 0.4 גרם ב 100 מ&quot;ל KCl dd H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האנק של צילומים מס &#39;2: 0.358 גרם Na 2 HPO 4 נטול מים, 0.60 גרם KH 2 PO 4 ב 100 מ&quot;ל DDH 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האנק של מלאי # 4: 0.72 גרם CaCl 2 ב 50 מ&quot;ל DDH 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האנק של מלאי # 5: 1.23 גרם MgSO 4 x7H 2 O ב 50 מ&quot;ל dd H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 X הצפת פוספט: 0.8% NaCl, KCl 0.02%, 0.02 מ &#39;PO4, pH 7.3 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון חסימת: 2% נסיוב עז רגיל, 1% שור בסרום אלבומין (BSA), dimethysulfoxide 1% (DMSO) </li></ul>

labeling and imaging cells in the zebrafish hindbrain

מפתח להבנת תהליכים המוךפו&quot;גנטי שהולך המעצבות את העובר החולייתנים הראשונים הוא היכולת תאים תמונה ברזולוציה גבוהה. בשנת עוברי דג הזברה, הזרקה של תוצאות ה-DNA פלסמיד בביטוי פסיפס, המאפשר ויזואליזציה של תאים בודדים או קבוצות קטנות של תאים<sup&gt; 1</sup&gt;. אנו מתארים כיצד הזרקה של קידוד הדנ&quot;א פלסמיד קרום במיקוד חלבון פלואורסצנטי ירוק (mGFP) בשליטת היזם בכל מקום ניתן להשתמש בתאים הדמיה עוברת neurulation. במרכז פרוטוקול זה הוא מתודולוגיה תאים הדמיה ברזולוציה גבוהה שכותרתו בסעיפים וגם בזמן אמת. פרוטוקול זה מחייב את הזריקה של ה-DNA mGFP לעוברי דג הזברה הצעיר. עוברים מעובדים ואז חתך vibratome, תיוג נוגדן הדמיה במיקרוסקופ confocal. לחלופין, עוברים לגור להביע mGFP ניתן הדמיה באמצעות זמן לשגות מיקרוסקופיה confocal. השתמשנו בעבר הגישה הזאת פשוט לנתח את התנהגות הסלולר כי הכונן היווצרות בצינור העצבי באזור למוח האחורי של עוברי דג הזברה<sup&gt; 2</sup&gt;. ההכנות קבוע מותר להדמיה חסר תקדים של צורות התא הארגון הצינור העצבי בעוד הדמיה לחיות השלים גישה זו המאפשרת הבנה טובה יותר של הדינמיקה הסלולר המתרחשים במהלך neurulation.

Watch this Scientific Journal Video about Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain at JoVE.com

Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain

מפתח להבנת תהליכים המוךפו&quot;גנטי שהולך המעצבים את העובר המוקדם הוא היכולת תאים תמונה ברזולוציה גבוהה. אנו מתארים כאן טכניקה תיוג תאים בודדים או קבוצות קטנות של תאים עוברי דג הזברה שלם עם חלבון הממברנה ממוקד, פלורסנט ירוק.

סימון תאים הדמיה למוח האחורי של דג הזברה

Key to understanding the morphogenetic processes that shape the early vertebrate embryo is the ability to image cells at high resolution. In zebrafish ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

זמן לשגות הדמיה חיה של Related Clonally ובתאים עצבית של פיתוח דג הזברה forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Electroporation של המוח האחורי כדי לעקוב אחר מסלולים ויעדי axonal Synaptic בעובר האפרוח

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

תיוג של תאים בודדים במערכת העצבים המרכזית של<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

תיוג מדרדר של תאים ברשתית גנגליון מבוגרים דג הזברה עם צבעי ניאון

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

The Mouse Hindbrain As a Model for Studying Embryonic Neurogenesis

העכבר Hindbrain כמודל ללימוד נוירוג'נסיס עובריים

The mouse embryo forebrain is the most commonly employed system for studying mammalian neurogenesis during development. However, the highly folded ...

Ablation of a Neuronal Population Using a Two-photon Laser and Its Assessment Using Calcium Imaging and Behavioral Recording in Zebrafish Larvae

אבלציה של אוכלוסיה עצביים באמצעות לייזר שני הפוטונים והערכה שלה באמצעות הדמיית סידן והקלטה התנהגותית הזחלים דג זברה

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

בתחום ההדמיה סידן Vivo של קו הצד תאים שיער בזחל דג זברה

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Labeling and Imaging of Amyloid Plaques in Brain Tissue Using the Natural Polyphenol Curcumin

תיוג והדמיה של שלטי עמילואיד ברקמת המוח באמצעות פוליפנול טבעי כורכומין

Deposition of amyloid beta protein (A&#946;) in extra- and intracellular spaces is one of the hallmark pathologies of Alzheimer&#39;s disease (AD). ...

In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal

In vivo הדמיה של רקמת מוח פעילה לחלוטין בזחלי דגי זברה ערים וצעירים על ידי הסרת גולגולת ועור

Understanding the ephemeral changes that occur during brain development and maturation requires detailed high-resolution imaging in space and time at ...