Name: labeling and imaging cells in the zebrafish hindbrain
Uploaded: 2010-07-25T17:00:00
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この作品は、R.ブリュースター（1R01GM085290 - 01A1）に授与されたNIHの助成金によって支えられている。

1.Microinjection <ol><li>希釈をコードするプラスミド膜をターゲットとした緑色蛍光タンパク質（MGFP、リチャードハーランドの礼儀）40 ng / mlの濃度に。 DNAはキアゲンのマキシプレップキットを使用して精製されたプラスミド（リチャードハーランドのmGFP/PCS2 +、礼儀）を線形化することによって調製される。ソリューションへのフェノールレッドの加算は、（総容積1 / 10に希釈）ソリューショ?...

<ol>
	<li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish Practical approach series. , (2002).</li><li>Hong, E., Brewster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-cadherin+is+required+for+the+polarized+cell+behaviors+that+drive+neurulation+in+the+zebrafish.">N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish.</a> Development. 133, 3895-3905 (2006).</li><li>Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Cell+Motility+and+Actin+Cytoskeleton+of+Individual+Neurons+and+Neural+Crest+Cells+in+Zebrafish+Embryos.">Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

結論では、標識技術は、ゼブラフィッシュ胚における形態形成のプロセスの単一細胞の分析を可能にするここで説明する。このプロトコルの主な重点は、ユビキタスプロモーターの制御下MGFPを使用して、神経管のイメージング標識細胞のための方法になります。この一過性発現アッセイのリーダーの追加のアプリケーション用にアンデルセンらによる最近の論文を参照する必要があり...

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Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1 1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County 2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2 1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center 2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County

A correction to the author affiliations has been made for the article Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain.

Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain

ソリューション<ul><li>ハンクの株式第1位：8.0グラムのNaClを100ml DD H 2 Oで0.4グラムのKCl </li><li>ハンクの株式＃2：0.358グラムのNa 2 HPO 4、無水、100ミリリットルのddH 2 Oで0.60グラムのKH 2 PO 4 </li><li>ハンクの証券第4位：50ミリリットルのddH 2 Oで0.72グラムのCaCl 2 </li><li>ハンクの株式第5位：50ミリリットルDD H 2 Oで1.23グラムのMgSO 4 x7H 2 O </li><li> 1 Xリン酸緩衝液：0.8％のNaCl、0.02％のKCl、0.02 M PO4、pH7.3に</li><li>ブロッキング溶液：2％正常ヤギ血清、1％ウシ血清アルブミン（BSA）、1％dimethysulfoxide（DMSO） </li></ul>

labeling and imaging cells in the zebrafish hindbrain

初期の脊椎動物の胚を形成する形態形成のプロセスを理解するための鍵は、高解像度での画像セルにできることです。ゼブラフィッシュ胚、モザイク式の中のプラスミドDNAの結果の注入は、単一の細胞または細胞の小さなクラスターの可視化を可能に<sup&gt; 1</sup&gt;。我々は、ユビキタスプロモーターの制御下でプラスミドDNAのエンコーディング膜をターゲットとする緑色蛍光タンパク質（MGFP）の注入は神経胚形成を受けているイメージング細胞に使用できる方法について説明します。このプロトコルの中心は、セクションでもリアルタイムで高分解能でイメージング標識された細胞のための方法論です。このプロトコルは、若いゼブラフィッシュ胚にMGFPのDNAの注入を必要とする。胚はその後ビブラトーム切片、抗体標識と共焦点顕微鏡によるイメージングのために処理されます。また、MGFPを表現するライブ胚をタイムラプス共焦点顕微鏡を用いて画像化することができます。我々は以前、ゼブラフィッシュ胚の後脳領域で神経管の形成を駆動する細胞の挙動を分析するためにこの簡単なアプローチを使用している<sup&gt; 2</sup&gt;。ライブイメージングは​​、神経胚形成の間に起こる細胞のダイナミクスの理解を可能にするこのアプローチを補完しながら神経管の細胞の形状や組織の前例のない可視化のために許容される固定の準備。

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Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain

初期胚を形成する形態形成のプロセスを理解するための鍵は、高解像度での画像セルにできることです。ここでは、細胞膜をターゲットとする緑色蛍光タンパク質で全体のゼブラフィッシュの胚では細胞の単一細胞または小さなクラスターを標識するためのテクニックを説明します。

ゼブラフィッシュ後脳における標識およびイメージング細胞

Key to understanding the morphogenetic processes that shape the early vertebrate embryo is the ability to image cells at high resolution. In zebrafish ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

開発ゼブラフィッシュ前脳におけるクローン関連の神経前駆細胞のタイムラプスライブイメージング

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ蛹

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

ニワトリ胚における軸索軌道とシナプスターゲットを追跡する後脳のエレクトロ

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

の中枢神経系における単一細胞のラベリング<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

蛍光色素で大人のゼブラフィッシュの網膜神経節細胞の逆行性標識

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

The Mouse Hindbrain As a Model for Studying Embryonic Neurogenesis

萌芽期の神経を研究するためのモデルとしてのマウス脳

The mouse embryo forebrain is the most commonly employed system for studying mammalian neurogenesis during development. However, the highly folded ...

Ablation of a Neuronal Population Using a Two-photon Laser and Its Assessment Using Calcium Imaging and Behavioral Recording in Zebrafish Larvae

二光子励起レーザーとゼブラフィッシュ幼虫におけるカルシウム イメージング法と行動記録を用いた評価を用いたニューロン集団のアブレーション

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

ゼブラフィッシュ稚魚における側線有毛細胞の生体内カルシウム イメージング

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Labeling and Imaging of Amyloid Plaques in Brain Tissue Using the Natural Polyphenol Curcumin

天然ポリフェノールクルクミンを用いた脳組織におけるアミロイドプラークの標識とイメージング

Deposition of amyloid beta protein (A&#946;) in extra- and intracellular spaces is one of the hallmark pathologies of Alzheimer&#39;s disease (AD). ...

In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal

目覚めしたゼブラフィッシュ幼虫と頭蓋骨と皮膚除去による若年組織の完全に活性な脳組織のインビボイメージング

Understanding the ephemeral changes that occur during brain development and maturation requires detailed high-resolution imaging in space and time at ...