Name: labeling and imaging cells in the zebrafish hindbrain
Uploaded: 2010-07-25T17:00:00
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이 작품은 R. 브루 스터 (1R01GM085290 - 01A1)에게 수여 NIH 교부금에 의해 지원되었다.

1.Microinjection <ol><li> 희석 플라스미드 인코딩 막 타겟 그린 형광 단백질 (mGFP, 리차드 할랜드의 호의) 40 NG / ML의 농도. DNA는 Qiagen의 맥시 준비 키트를 사용하여 정화 플라스미드 (리차드 할랜드의 mGFP/PCS2 +, 호의)를 linearizing으로 준비가되어 있습니다. 솔루션에 페놀 레드 (10분의 1 총 볼륨을 희석)의 추가는 솔루션을 시각화하는 것이 좋습니다. 얼음 DNA 솔루션을 유지. </li><li> 졸업 슬라이드에 바늘?...

<ol>
	<li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish Practical approach series. , (2002).</li><li>Hong, E., Brewster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-cadherin+is+required+for+the+polarized+cell+behaviors+that+drive+neurulation+in+the+zebrafish.">N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish.</a> Development. 133, 3895-3905 (2006).</li><li>Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Cell+Motility+and+Actin+Cytoskeleton+of+Individual+Neurons+and+Neural+Crest+Cells+in+Zebrafish+Embryos.">Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

결론적으로, 분류 기술은 zebrafish 배아에 morphogenetic 프로세스의 단일 세포 분석을위한 수 있도록 여기에 설명되어 있습니다. 이 프로토콜의 주요 강조는 유비 쿼터스 모터의 제어하에 mGFP을 사용하여 신경 튜브의 영상 표시 전지 방식에 있습니다. 이 과도 표현 분석 독자의 추가 어플 리케이션을위한 안데르센 외의 최근 논문을 참조해야합니다. 3.

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Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1 1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County 2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2 1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center 2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County

A correction to the author affiliations has been made for the article Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain.

Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain

솔루션 <ul><li> 행크의 주식 # 1 : 8.0 g NaCl, 100 ML DD H 2 O에서 0.4 g KCl </li><li> 행크의 주식 # 2 : 0.358 g 나 2 HPO 4 무수, 100 ML ddH 2 O에서 0.60 g KH 2 PO 4 </li><li> 행크의 주식 # 4 : 50 ML ddH 2 O에서 0.72 g CaCl 2 </li><li> 행크의 주식 # 5 : 50 ML DD H 2 O에서 1.23 g MgSO 4 x7H 2 O </li><li> 1 X 인산 버퍼 : 0.8 % NaCl, 0.02 %의 KCl, 0.02 M PO4, 산도 7.3 </li><li> 차단 솔루션 : 2퍼센트 정상 염소 혈청, 1 % 소 혈청 알부민 (BSA), 1 %의 dimethysulfoxide (DMSO) </li></ul>

labeling and imaging cells in the zebrafish hindbrain

초기 척추의 배아를 형성 morphogenetic 프로세스를 이해하는 데 핵심 고해상도로 이미지 세포 수있는 능력입니다. zebrafish 배아, 모자이크 표현의 플라스미드 DNA 결과의 주입이 단일 세포 또는 세포의 작은 클러스터의 시각화에 대한 허용에<sup&gt; 1</sup&gt;. 우리는 유비 쿼터스 모터의 제어하에 플라스미드 DNA 인코딩 막 타겟 그린 형광 단백질 (mGFP)의 분사가 neurulation를 겪고 이미징 세포에 사용할 수있는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜에 센트럴 섹션에 있으며, 실시간으로 고해상도의 영상 표시 세포에 대한 방법론이다. 이 프로토콜은 젊은 zebrafish의 배아에 mGFP의 DNA의 삽입을 알아볼 수 있습니다. 배아는 다음 vibratome sectioning, 항체 라벨과 공촛점 현미경으로 영상에 대한 처리됩니다. 또는 mGFP을 표현 라이브 배아는 시간이 경과 공촛점 현미경을 사용하여 몇 군데하실 수 있습니다. 우리는 이전에 zebrafish 배아의 hindbrain 지역에서 신경 튜브 형성을 유발 세포 행동을 분석하는이 간단한 접근 방법을 사용했을<sup&gt; 2</sup&gt;. 라이브 영상은 neurulation 동안을 세포 역학의 이해를 가능하게이 방법을 보완하면서 고정 준비가 세포 모양과 신경 튜브 조직의 전례 시각화를위한있었습니다.

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Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain

초기 배아를 형성 morphogenetic 프로세스를 이해하는 데 핵심 고해상도로 이미지 세포 수있는 능력입니다. 우리는 여기서 세포막 타겟 그린 형광 단백질로 전체 zebrafish의 배아에서 세포의 단일 세포 또는 작은 클러스터를 라벨에 대한 기술을 설명합니다.

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Key to understanding the morphogenetic processes that shape the early vertebrate embryo is the ability to image cells at high resolution. In zebrafish ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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개발 Zebrafish Forebrain에 Clonally 관련 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상

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연구

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