Name: photoconversion of purified fluorescent proteins and dual-probe optical highlighting in live cells
Uploaded: 2010-06-26T23:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> نشكر مايك ديفيدسون جورج (جامعة ولاية فلوريدا) لتقديم الحمض النووي بلازميد ترميز البروتينات الفلورية. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح GM72048 (لبرنامج عمل الدوحة). </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1. إعداد عينات الحبرية بروتين فلوري </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> قطرات بروتين فلوري عينة تتكون من مستحلب 1-octanol/water مع بروتين فلوري المقيمين في المرحلة المياه. وتأتي هذه مستحلب بين شريحة المجهر والزجاج مربعة طول ضلعها 22 غطاء لتطبيقات المجهر. </p><ol style=";text-align:right;dir...

<ol>
	<li>Kremers, G. J., Hazelwood, K. L., Murphy, C. S., Davidson, M. W., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoconversion+in+orange+and+red+fluorescent+proteins.">Photoconversion in orange and red fluorescent proteins.</a> <em style='font-style: italic'>Nature Methods</em>. <b>6</b>, 355-358 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> وتنقيته قطيرة عينة بروتين فلوري هو تنسيق عينة مريحة للغاية لتوصيف البروتينات الفلورية photophysical ، على سبيل المثال لدراسة حركية وحركية photobleaching photoconversion. حجم القطيرات الصغيرة جدا (~ 20 بيكو لتر) يسهل photobleaching photoconversion والتجارب ، والتي قد يكون من الصعب القيام بها في النظم ال?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Microsope slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR Scientific</td>
<td>48312-003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>22 mm cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>2940-245</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-octanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>O4500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>methyltrimethoxysilane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M6420</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MatTek dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corp.</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-019</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

photoconversion of purified fluorescent proteins and dual-probe optical highlighting in live cells

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> البروتينات الفلورية Photoconvertible (PC - FPS) هي فئة من البروتينات الفلورية مع &quot;هيغليغتر البصرية&quot; القدرة ، وهذا يعني أنه يمكن تغيير لون ومضان عن التعرض لضوء طول موجة محددة. تسليط الضوء على العلامات الضوئية يسمح موسع بعض الفئات السكانية من الجزيئات نيون ، وبالتالي فهي مثالية لتعقب خلايا مفردة أو العضيات. </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> المعلمات حرجة للphotoconversion كفاءة وكثافة ومدة التعرض للضوء photoconversion. إذا كانت كثافة منخفضة جدا ، وسوف يكون بطيئا photoconversion أو لا يحدث على الإطلاق. من ناحية أخرى ، يمكن أن كثافة أكثر من اللازم أو التعرض لفترة طويلة جدا photobleach البروتين وبالتالي الحد من كفاءة photoconversion. </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> يصف هذا البروتوكول نهجا عاما كيفية إعداد ليزر متحد البؤر المجهر لفحص الطلبات photoconversion PC - FP. أولا ، نحن وصف الإجراء لإعداد عينات الحبرية تنقية البروتين. هذا التنسيق هو نموذج مناسب جدا لدراسة السلوك photophysical من البروتينات الفلورية تحت المجهر. ثانيا ، سوف نستخدم عينة بروتين الحبرية لإظهار كيفية تكوين المجهر لphotoconversion. وأخيرا ، فإننا سوف تظهر كيفية تنفيذ الضوئية في تسليط الضوء على الخلايا الحية ، بما في ذلك التحقيق تسليط الضوء المزدوجة البصرية مع mOrange2 وDronpa. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells at JoVE.com

Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells

<p class="jove_content">هذا البروتوكول يصف النهج العام لأداء photoconversion من البروتينات الفلورية على مجهر المسح الضوئي ليزر متحد البؤر. نحن تصف إجراءات photoconversion عينات البروتين puried ، فضلا عن ثنائي التحقيق تسليط الضوء على الخلايا الضوئية في العيش مع وmOrange2 Dronpa.</p>

Photoconversion منقى من البروتينات ونيون المزدوجة التحقيق تسليط الضوء البصري في الخلايا الحية

Photoconvertible fluorescent proteins (pc-FPs) are a class of fluorescent proteins with "optical highlighter" capability, meaning that the color of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

وسم الخلايا الجذعية مع الأصباغ نيون للمنظمات غير الغازية مع الكشف عن التصوير الضوئي

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Proper Care and Cleaning of the Microscope

العناية والتنظيف السليم للمجهر

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a ...

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

وعلى النقيض من مرحلة التدخل التفاضلية المجهري التباين (DIC)

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

الفلورسنت وصفها من COS - 7 تعرب عن البروتينات الانصهار SNAP - شعارا لتصوير الخلايا الحية

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in <em>Xenopus</em> Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

الاستقطاب إزفاء من البروتينات في نيون<em> القيطم</em> الأدمة في الاستجابة لاشارة Wnt

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in <em>Drosophila</em> Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

يعيش التصوير من البروتينات التي تحمل علامات GFP في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; البويضات

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

حيوي داخلي المجهري للهياكل التصوير التحت خلوية في الفئران لايف تعرب عن البروتينات الفلورية

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

<em>In vivo</em> Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

<em>في الجسم الحي</em> تتبع نسيلي من الخلايا الجذعية المكونة للدم والسلف تميزت خمسة البروتينات الفلورية باستخدام الميكروسكوب متحد البؤر وMultiphoton

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

إعادة إعماره الوظيفية وآخر قناة قياسات تنقية Wildtype والمسخ CFTR البروتين

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Characterization of Calcification Events Using Live Optical and Electron Microscopy Techniques in a Marine Tubeworm

توصيف تكلس الأحداث عن طريق لايف البصرية والمجهر الإلكتروني تقنيات في Tubeworm البحرية

Characterizing the first event of biological production of calcium carbonate requires a combination of microscopy approaches. First, intracellular pH ...