Name: photoconversion of purified fluorescent proteins and dual-probe optical highlighting in live cells
Uploaded: 2010-06-26T23:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells at JoVE.com

<p class="jove_content"> Biz floresan proteinleri kodlayan plazmid DNA sağlamak için Mike W. Davidson (Florida Eyalet Üniversitesi) teşekkür ederim. Bu çalışma, Sağlık hibe GM72048 (dwp) Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından da desteklenmiştir. </p>

<p class="jove_title"> 1. Floresan protein damlacık numunelerin hazırlanması </p><p class="jove_content"> Bir floresan protein damlacık örnek su aşamasında bulunan floresan protein ile 1-octanol/water emülsiyon oluşur. Bu emülsiyon mikroskopi uygulamaları için bir mikroskop lamı ve 22 mm kare cam kapak arasında sıkışmış. </p><ol><li> Floresan protein damlacık örnekleri yapmadan önce mikroskop slayt ve kapak camları hidrofobik bir ajan ile temizlenmeli ve kaplanmış olması gerekir. </li><li> Cam, aseton ile 5 dakika yık...

<ol>
	<li>Kremers, G. J., Hazelwood, K. L., Murphy, C. S., Davidson, M. W., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoconversion+in+orange+and+red+fluorescent+proteins.">Photoconversion in orange and red fluorescent proteins.</a> <em style='font-style: italic'>Nature Methods</em>. <b>6</b>, 355-358 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content"> Saflaştırılmış floresan protein damlacık örnek kinetik ve Fotoçevrim kinetiği photobleaching çalışma örneğin, floresan proteinleri photophysical karakterizasyonu için çok uygun bir örnek biçimidir. Photobleaching ve küvet tabanlı sistemler gerçekleştirmek için zor olabilir Fotoçevrim deneyler, son derece küçük damlacık hacmi (~ 20 picolitre) kolaylaştırır. Buna ek olarak, damlacık örnek ideal Fotoçevrim uygulamalar için bir konfokal mikroskop kurmak için uygundur burada gösterilir. H...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Microsope slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR Scientific</td>
<td>48312-003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>22 mm cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>2940-245</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-octanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>O4500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>methyltrimethoxysilane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M6420</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MatTek dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corp.</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-019</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

photoconversion of purified fluorescent proteins and dual-probe optical highlighting in live cells

<p class="jove_content"> Photoconvertible floresan proteinleri (pc-FP) floresan renk, belirli bir dalga boyunda ışığa maruz tarafından değiştirilebilir anlamına gelir &quot;optik işaretleme&quot; özelliğine sahip bir sınıf, floresan proteinleri. Optik vurgulayarak, noninvaziv bir ICSI&#39;nin floresan moleküllerin işaretlenmesi sağlar ve bu nedenle tek hücreler veya organeller izlemek için idealdir. </p><p class="jove_content"> Verimli Fotoçevrim için kritik parametreleri Fotoçevrim ışık şiddeti ve maruz kalma süresi. Yoğunluğu çok düşükse, Fotoçevrim yavaş ya da hiç ortaya olacaktır. Öte yandan, çok fazla yoğunluk ya da çok uzun süre maruz kaldıklarından protein photobleach ve böylece Fotoçevrim etkinliğini azaltmak. </p><p class="jove_content"> Bu protokol, pc-FP Fotoçevrim uygulamalar için bir konfokal lazer tarama mikroskobu nasıl kurmak için genel bir yaklaşım açıklanmıştır. İlk olarak, saflaştırılmış protein damlacık numunelerin hazırlanması için bir prosedür açıklanmaktadır. Bu örnek biçimi mikroskop altında floresan proteinleri photophysical davranış eğitimi için çok uygundur. İkincisi, biz Fotoçevrim için mikroskop nasıl yapılandırılacağı göstermek için protein damlacık örnek kullanabilirsiniz. Ve nihayet, mOrange2 ve Dronpa çift prob, optik vurgulayarak dahil olmak üzere, canlı hücreleri, optik vurgulama nasıl gerçekleştirileceği gösterecektir. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells at JoVE.com

Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells

<p class="jove_content">Bu protokol bir konfokal lazer tarama mikroskobu, floresan proteinleri Fotoçevrim gerçekleştirmek için genel bir yaklaşım açıklar. Biz Fotoçevrim puried protein örneklerinin yanı sıra, mOrange2 ve Dronpa canlı hücreleri çift prob, optik vurgulama için prosedürler açıklanmaktadır.</p>

Canlı Hücrelerde Floresan Proteinleri ve Çift prob Optik Vurgulama Saf, Fotoçevrim

Photoconvertible fluorescent proteins (pc-FPs) are a class of fluorescent proteins with "optical highlighter" capability, meaning that the color of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Proper Care and Cleaning of the Microscope

Mikroskop Uygun Bakım ve Temizlik

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a ...

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

Canlı Hücre Görüntüleme için SNAP-tag Fusion Proteinler ifade COS-7 Floresan Etiketleme

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in <em>Xenopus</em> Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Floresan Proteinleri Polarize Translokasyon<em> Xenopus</em> Wnt Sinyalizasyonu Cevabı Ektoderm

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in <em>Drosophila</em> Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

GFP etiketli Proteinlerin Görüntüleme Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Oosit

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Floresan Proteinler ifade Canlı Farelerde Görüntüleme hücrealtı Yapıların Intravital Mikroskopi

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

<em>In vivo</em> Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin <em>in vivo</em> klonal <em>Takip</em>

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Saf Yabanitip ve Mutant CFTR Protein Fonksiyonel Sulandırma ve Kanal Aktivite Ölçümleri

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Characterization of Calcification Events Using Live Optical and Electron Microscopy Techniques in a Marine Tubeworm

Bir Deniz Tubeworm Canlı Optik ve Elektron Mikroskobu Teknikleri Kullanılarak kalsifikasyon Olaylar Karakterizasyonu

Characterizing the first event of biological production of calcium carbonate requires a combination of microscopy approaches. First, intracellular pH ...