Name: DNA Origami Fork Assembly for DNA Origami Nanoantenna (DONA) (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-07-21T12:40:00
Duration: 2 min 21 s
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dna origami fork assembly for dna origami nanoantenna (dona)

Single-Molecule Surface-Enhanced Raman Scattering Measurements Enabled by Plasmonic DNA Origami Nanoantennas

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DNA Origami Fork Assembly for DNA Origami Nanoantenna (DONA) (Video) | JoVE 

DNA Origami Fork Assembly per DNA Origami Nanoantenna (DONA)

Per auto-assemblare la struttura dell'origami del DNA in un vaso iniziare preparando una miscela di 2,5 nanomolari del filamento di scaffold circolare M13mp18 e 100 nanomolari dei 201 punti oligonucleotidici corti in tampone TAE integrato con cloruro di magnesio 15 millimolare. Quindi regolare il volume totale della soluzione a 100 microlitri utilizzando acqua ultrapura. Ricottura della soluzione in un termociclatore utilizzando un gradiente di temperatura.Inizia riscaldando rapidamente a 80 gradi Celsius e segui il programma di gradiente di temperatura visualizzato passo dopo passo. Per purificare la miscela dalle graffette in eccesso aggiungere 100 microlitri della soluzione di origami di DNA a un filtro amicon da 100 kilodalton di peso molecolare. Seguito dall'aggiunta di 400 microlitri di acqua ultrapura.Quindi centrifugare a 6.000 g per otto minuti a temperatura ambiente. Dopo la centrifugazione, rimuovere il filtro e capovolgere il tubo per eliminare il filtrato. Aggiungere 400 microlitri di acqua ultrapura al filtro e centrifugare come dimostrato in precedenza.Per raccogliere la soluzione di nanostruttura purificata. Capovolgere il filtro in un nuovo tubo e centrifugare a 1.000 g per due minuti a temperatura ambiente seguendo le istruzioni del produttore. Il corretto assemblaggio della forcella degli origami del DNA è stato assicurato utilizzando la microscopia a forza atomica o l'imaging AFM.Come previsto, la maggior parte delle forcelle erano solide senza braccia rotte. Tuttavia, il ponte tra i bracci era difficile da immaginare a causa del suo diametro ridotto e dell'elevata flessibilità.

Research

JoVE Journal

Chemistry

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Ricerca

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