Name: High-Pressure Freezing (HPF), Freeze-Substitution Fixation (FSF) and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-28T12:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-Pressure Freezing HPF, Freeze-Substitution Fixation FSF and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly at JoVE.com

high-pressure freezing (hpf), freeze-substitution fixation (fsf) and rehydration of sapphire disc-carrier assembly

Direct Synthesis of EM-Visible Gold Nanoparticles in Cells for Protein Localization Analysis with Well-Preserved Ultrastructure

Watch this Scientific Journal Video about High-Pressure Freezing HPF, Freeze-Substitution Fixation FSF and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly at JoVE.com

High-Pressure Freezing (HPF), Freeze-Substitution Fixation (FSF) and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly (Video) | JoVE 

Högtrycksfrysning (HPF), fryssubstitutionsfixering (FSF) och rehydrering av safirskivbärarenhet

Förbered en högtrycksfrysnings- eller HPF-maskin minst två timmar innan experimentet påbörjas enligt tillverkarens instruktioner. Överför typ A HPF aluminiumbärare till ett två millimeter centrifugrör som innehåller en milliliter etanol och sonikera dem i en ultraljudsrengörare i 10 minuter. Torka bärarna i en petriskål täckt med kvalitativt filterpapper.Blötlägg de förrenade bärarna i 1-hexadecen. Använd fin pincett för att plocka upp en förberedd safirskiva från HeLa-cellodlingsskålen. Vidrör den märkta ytan med kvalitativt filterpapper för att ta bort överflödigt medium.Montera safirskivan i HPF-provhållaren och täck snabbt skivan med en 0,025 millimeter djup aluminiumbärare innehållande 1-hexadecen. Aspirera överskottslösningen med kvalitativt filterpapper. Ladda provhållaren för högtrycksfrysning.Lossa safirskivbärarenheten under flytande kväve i en kryolåda av skum. Bered två milliliter fryssubstitutionsfixering eller FSF-lösning, en i en 20 millimeter rund polypropenbehållare i en dragskåp och frys den med flytande kväve. Använd en förkyld pincett för att ladda safirskivorna och bärarenheterna i behållaren med fryst FSF-lösning en under flytande kväve.Överför denna behållare till en förkyld automatiserad frysersättningsmaskinkammare för FSF-bearbetning vid minus 90 grader Celsius. Håll proverna vid minus 90 grader Celsius i en timme, separera sedan safirskivorna från bärarna med förkyld pincett och se till att de markerade sidorna på safirskivorna är vända nedåt. Håll proverna på minus 90 grader Celsius i ytterligare 8 till 10 timmar innan du värmer upp till minus 60 grader Celsius inom tre timmar.Byt ut FSF-lösningen i behållaren mot förkyld aceton och inkubera vid minus 60 grader Celsius i en timme. Upprepa denna acetontvätt två gånger. Värm upp till minus 30 grader Celsius inom tre timmar.Förbered och förkyl under tiden två milliliter FSF-lösning två i ett två-milliliter centrifugrör vid minus 30 grader Celsius. Byt ut acetonen mot FSF-lösning två och inkubera vid minus 30 grader Celsius i tre timmar. Byt sedan ut FSF-lösning två i behållaren med förkyld aceton och inkubera i 30 minuter vid minus 30 grader Celsius.Upprepa denna acetontvätt två gånger. Värm i minus 30 till 4 grader Celsius inom två timmar. Byt ut acetonen med två milliliter 0,2 molar HEPES-buffert.Byt buffert en gång och inkubera vid rumstemperatur eller fyra grader Celsius över natten.

Research

JoVE Journal

Biology

High-Pressure Freezing (HPF), Freeze-Substitution Fixation (FSF) and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly

Direct Synthesis of Gold Nanoparticles for Protein Localization Analysis

Direct Synthesis of EM-Visible Gold Nanoparticles in Cells for Protein Localization Analysis with Well-Preserved Ultrastructure (Video) | JoVE 

Direkt syntes av EM-synliga guldnanopartiklar i celler för proteinlokaliseringsanalys med välbevarad ultrastruktur

Analyzing the precise localization of protein molecules in cells with ultrastructural resolution is of great significance for the study of various ...

﻿Preparing Sapphire Discs for Cell Culture

ï»¿Preparing Sapphire Discs for Cell Culture (Video) | JoVE 

Förbereda safirskivor för cellodling

Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs

Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs (Video) | JoVE 

Guldnanopartikelsyntes för däggdjursceller med safirskivor