Name: Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-28T12:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs at JoVE.com

gold nanoparticle synthesis for mammalian cells using sapphire discs

Direct Synthesis of EM-Visible Gold Nanoparticles in Cells for Protein Localization Analysis with Well-Preserved Ultrastructure

Watch this Scientific Journal Video about Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs at JoVE.com

Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs (Video) | JoVE 

Gouden nanodeeltjessynthese voor zoogdiercellen met behulp van saffierschijven

Neem een vooraf voorbereide HPF- en FSF-behandelde saffierschijf met stabiele HeLa-cellen, was deze gedurende vijf minuten met PBS-A-buffer en herhaal dit proces drie keer. Breng de saffierschijven over in een kweekschaal van 35 millimeter met één milliliter PBS-A-buffer bij kamertemperatuur. Vervang de PBS-A-buffer in de kweekschaal door één milliliter reducerende oplossing en incubeer gedurende één uur bij kamertemperatuur.Bereid de gouden voorloper in één milliliter reducerende oplossing en meng onmiddellijk door vortexing. Voeg 80 microliter 500 millimolaire D-Penicillamine in dubbel gedestilleerd water toe aan de goudvoorloperoplossing. En meteen draaikolk.Vervang de oplossing in de gekweekte schaal door één milliliter goudprecursoroplossing en incubeer gedurende twee uur bij vier graden Celsius. Voeg 20 tot 100 microliter van de vers bereide natriumboorhydride-oplossing toe aan de goudprecursoroplossing, schud onmiddellijk om goed te mengen en incubeer gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Vervang de oplossing door twee milliliter PBS-A-buffer om de reactie te stoppen.Bereid vervolgens het epoxyharsmengsel volgens de instructies van de fabrikant, breng de saffierschijven over naar insluitende capsules met platte bodem en infiltreer gedurende ten minste 30 minuten bij kamertemperatuur met hars. Polymeriseer het monster bij 60 graden Celsius in een oven gedurende ten minste 18 uur. Bereid ultradunne delen van het gepolymeriseerde monster voor door de monsterblokken voorzichtig bij te snijden met een scheermes om de saffierschijven bloot te leggen.Dompel de blokpunten met saffierschijven enkele seconden in vloeibare stikstof en ontdooi de kamertemperatuur. Herhaal de vries-dooiactie meerdere keren om de schijven van de blokken los te maken. Het EGFP-MTn-KDEL-eiwit verscheen als twee tot vijf nanometer grote gouden nanodeeltjes die uitsluitend verdeeld waren in het perifere ER-lumen en in de perinucleaire ruimte van de nucleaire envelop.De goed bewaarde ultrastructuur maakte de identificatie van gelabelde eiwitten met één molecuul mogelijk en vergemakkelijkte de analyse van organelinteracties, zoals ER-mitochondriale interacties. Nanodeeltjes van het Ost4-EGFP-MTn-eiwit bakenden het ER-membraan af in het buitenmembraan van de nucleaire envelop. Evenzo vertoonden de Mito-acGFP-MTn-expressiecellen specifieke etikettering in de mitochondriale matrix.

Research

JoVE Journal

Biology

Gold Nanoparticle Synthesis for Mammalian Cells Using Sapphire Discs

Direct Synthesis of Gold Nanoparticles for Protein Localization Analysis

Direct Synthesis of EM-Visible Gold Nanoparticles in Cells for Protein Localization Analysis with Well-Preserved Ultrastructure (Video) | JoVE 

Directe synthese van EM-zichtbare gouden nanodeeltjes in cellen voor eiwitlokalisatieanalyse met goed bewaarde ultrastructuur

Analyzing the precise localization of protein molecules in cells with ultrastructural resolution is of great significance for the study of various ...

﻿Preparing Sapphire Discs for Cell Culture

ï»¿Preparing Sapphire Discs for Cell Culture (Video) | JoVE 

Saffierschijven voorbereiden voor celkweek

High-Pressure Freezing (HPF), Freeze-Substitution Fixation (FSF) and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly

High-Pressure Freezing (HPF), Freeze-Substitution Fixation (FSF) and Rehydration of Sapphire Disc-Carrier Assembly (Video) | JoVE 

High-Pressure Freezing (HPF), Freeze-Substitution Fixation (FSF) en Rehydratie van Saffier Disc-Carrier Assembly