Name: Murine Adipose-Derived Mesenchymal Cell Isolation, Maintenance and Characterization (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Adipose-Derived Mesenchymal Cell Isolation, Maintenance and Characterization at JoVE.com

murine adipose-derived mesenchymal cell isolation, maintenance and characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Watch this Scientific Journal Video about Murine Adipose-Derived Mesenchymal Cell Isolation, Maintenance and Characterization at JoVE.com

Murine Adipose-Derived Mesenchymal Cell Isolation, Maintenance and Characterization (Video) | JoVE 

Murin fedtafledt mesenkymal celleisolering, vedligeholdelse og karakterisering

Inde i et biosikkerhedsskab skal du fjerne murine fedtvæv med sterile tang. Når overskydende PBS er fjernet, overføres vævet til en anden petriskål og vaskes to gange i fem minutter hver med 10 ml PBS AA-opløsning. Tilsæt 20 ml forberedt kollagenaseopløsning i et krystalbægerglas, der indeholder et kvadratcentimeter fragmenteret væv og en magnetisk stang.Det forseglede bægerglas inkuberes ved 37 grader Celsius med kontinuerlig omrøring. Filtrer homogenatet gennem en 40-mesh 0,38 millimeter rustfrit stålåbning Filtrer på en petriskål og opsaml cellesuspensionen i et sterilt 50 ml konisk rør. Suspender forsigtigt den stromale vaskulære fraktion i 20 ml varmt suppleret DMEM og centrifuger suspensionen.Efter kassering af supernatanten vaskes cellerne forsigtigt to gange med 40 ml DMEM-substrat uden tilskud. Suspender ganen i fem ml suppleret DMEM. Overfør suspensionen til en 25 kvadratcentimeter T-flaske og inkuber.Vask celler tre gange med fem ml varm PBS AA og to gange med ikke-suppleret DMEM. For at fjerne cellerester og ikke-murinceller tilsættes fem milliliter frisk, varm suppleret DMEM og skift medium hver tredje til fire dage. Når cellerne når 90 til 100% sammenløb, tilsættes en milliliter varm trypsin EDTA-opløsning til de DMEM-vaskede celler.Inkuber i fem til syv minutter ved 37 grader Celsius. Tilsæt fire ml suppleret DMEM til det løsrevne cellemonolag og opdel forsigtigt suspensionen. Suspender cellerne i fem ml varmt suppleret DMEM.Efter centrifugering og kassering af supernatanten blandes pelletten forsigtigt i en milliliter suppleret DMEM. Plet cellerne med trypanblå og tæl dem i et Neubauer-kammer. Frøceller i T-75 kolber.For at sikre kolonidannelse og høj proliferation observeres morfologien af hæmatoxylin og eosinfarvede celler under et optisk mikroskop. Hæmatoxylin- og eosinfarvning afslører omfattende cytoplasma med aflange forlængelser og rigelige intracellulære mikrofilamenter.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Adipose-Derived Mesenchymal Cell Isolation, Maintenance and Characterization

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Isolering og identifikation af mesenkymale stamceller afledt af fedtvæv fra Sprague Dawley rotter

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...

Murine Adipose Tissue Excision

Murine Adipose Tissue Excision (Video) | JoVE 

Murine fedtvæv Excision

Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers (Video) | JoVE 

Immunofluorescerende påvisning af fedtafledte stamcelleekspressionsmarkører

Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers (Video) | JoVE 

Flowcytometrisk påvisning af fedtafledte stamcelleekspressionsmarkører

Adipose-Derived Stem Cell Differentiation to the Adipogenic Lineage

Adipose-Derived Stem Cell Differentiation to the Adipogenic Lineage (Video) | JoVE 

Fedtafledt stamcelledifferentiering til den adipogene afstamning