Name: Episomal Reprogramming of Dermal Fibroblasts to Generate Human-Induced Pluripotent Stem Cells (HiPSCs) (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-05-26T13:20:00
Duration: 3 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Episomal Reprogramming of Dermal Fibroblasts to Generate Human-Induced Pluripotent Stem Cells HiPSCs at JoVE.com

episomal reprogramming of dermal fibroblasts to generate human-induced pluripotent stem cells (hipscs)

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Watch this Scientific Journal Video about Episomal Reprogramming of Dermal Fibroblasts to Generate Human-Induced Pluripotent Stem Cells HiPSCs at JoVE.com

Episomal Reprogramming of Dermal Fibroblasts to Generate Human-Induced Pluripotent Stem Cells (HiPSCs) (Video) | JoVE 

Эписомальное перепрограммирование дермальных фибробластов для получения индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК)

Для начала возьмите колбу с культивируемыми клетками фибробластов, покройте 10-сантиметровую пластину для культивирования клеток, подходящую для культивирования hiPSC, четырьмя миллилитрами раствора холодного покрытия на пластину и инкубируйте пластину в течение одного часа при температуре 37 градусов Цельсия. После этого удалите среду из фибробластов и промойте их четырьмя миллилитрами предварительно разогретого PBS на колбу. Аспирируйте PBS и свяжите фибробласты с четырьмя миллилитрами трипсина-ЭДТА на колбу, инкубируя в течение пяти-семи минут при 37 градусах Цельсия.Контролируйте отслоение клеток с помощью фазово-контрастного микроскопа и, при необходимости, постучите по стенке колбы, чтобы отделить клетки от пластиковой поверхности. Переложите отделившиеся клетки в коническую трубку объемом 50 миллилитров и промойте пустые колбы шестью миллилитрами предварительно разогретой среды фибробластов. Соберите и объедините оставшиеся ячейки в коническую трубку.Затем центрифугируют клетки при 200 г в течение пяти минут при 20 градусах Цельсия. Аспирируйте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулы клетки в трех миллилитрах свежего, предварительно подогретого PBS. Пересчитайте клетки, перенесите 1,5 раза по 10 на шестой фибробласты в новую коническую трубку и заполните PBS до пятимиллиметровой отметки.Центрифугируйте пробирку на 200 г в течение пяти минут при температуре 20 градусов Цельсия. Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу ячейки в пяти миллилитрах электропорационной среды и снова центрифугу. Тем временем аспирируйте раствор покрытия из покрытой 10-сантиметровой пластины для культивирования клеток и добавьте семь миллилитров предварительно разогретой среды фибробластов.По окончании центрифугирования откажитесь от надосадочной жидкости и повторно суспендируйте гранулу ячейки в электропорационной среде с концентрацией 1,5 раза по 10 к шестой ячейке в 250 микрол. Перенесите суспензию ячейки объемом 250 микролитров в кювету для электропорации с зазором в четыре миллиметра. Затем готовят смесь для трансфекции плазмы, добавляя четыре микрограмма каждой плазмиды к общему объему 50 микролитров электропорационной среды.Перенесите смесь для трансфекции в кювету, аккуратно перемешайте щелчком и электропорируйте одним импульсом при напряжении 280 вольт. Наконец, перенесите 150 микролитров электропорированных фибробластов на подготовленную 10-сантиметровую пластину для культивирования клеток. Трижды перемешайте тарелку во всех направлениях, чтобы распределить ячейки, и инкубируйте в течение ночи.Фибробласты представлены в длинном веретенообразном фенотипе размером от 150 до 300 нанометров. После перепрограммирования появляются колонии с 50-микрометровыми маленькими ИПСК с четкими границами. ИПСК отличаются высоким соотношением ядер к телу и повышенной скоростью пролиферации.

Research

JoVE Journal

Biology

Episomal Reprogramming of Dermal Fibroblasts to Generate Human-Induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs)

Using Skin Biopsies to Generate Patient-Derived Podocytes

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies (Video) | JoVE 

Генерация подоцитов, полученных от пациента, из биопсии кожи

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...

﻿Outgrowth of Dermal Fibroblasts from a Skin Punch Biopsy

ï»¿Outgrowth of Dermal Fibroblasts from a Skin Punch Biopsy (Video) | JoVE 

Рост дермальных фибробластов в результате биопсии Skin Punch

Selection, Expansion, and Quality Control of hiPSCs Generated from Dermal Fibroblasts

Selection, Expansion, and Quality Control of hiPSCs Generated from Dermal Fibroblasts (Video) | JoVE 

Отбор, расширение и контроль качества ИПСК, полученных из дермальных фибробластов