Name: Collection, Fixation, and Mounting of Caudal Penduncle from Zebrafish after Cryoinjury (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-07-07T12:10:00
Duration: 3 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Collection, Fixation, and Mounting of Caudal Penduncle from Zebrafish after Cryoinjury at JoVE.com

collection, fixation, and mounting of caudal penduncle from zebrafish after cryoinjury

A Cryoinjury Model for Studying Skeletal Muscle Regeneration of the Caudal Peduncle in Adult Zebrafish

Watch this Scientific Journal Video about Collection, Fixation, and Mounting of Caudal Penduncle from Zebrafish after Cryoinjury at JoVE.com

Collection, Fixation, and Mounting of Caudal Penduncle from Zebrafish after Cryoinjury (Video) | JoVE 

Verzameling, fixatie en montage van caudale hanger van zebravis na cryoletsel

Bereid om te beginnen twee milliliter 4% formaline of een ander geschikt fixeermiddel voor. Houd ook een petrischaaltje, tang en chirurgische schaar bij de hand voordat u met de procedure begint. Leg de goed geëuthanaseerde gecryogewonde vis in een petrischaaltje met gedeïoniseerd water.Voer met een schaar een knip uit door het lichaam, voorste en achterste naar de caudale steel. Laat het weefsel uitbloeden in het gedeïoniseerde water in de petrischaal. Verzamel met behulp van een tang de caudale steel en breng deze over in de bereide fixatieve oplossing in een microcentrifugebuis.Keer de buis voorzichtig meerdere keren om. Was voor de montage het vaste weefsel in PBS gedurende 10 minuten op een wipstoel. Breng het vervolgens over in een microcentrifugebuis van twee milliliter met een oplossing van 30% sucrose in gedeïoniseerd water, voorgekoeld tot vier graden Celsius en keer de buis meerdere keren voorzichtig om.Laat de buis minstens 24 uur rechtop staan bij 4 graden Celsius. Vul een inbeddingsvorm met een laag OCT-montagemedium van vijf millimeter. Plaats met een tang de caudale steel op de bodem van de mal.Pas de oriëntatie aan voor transversale of coronale secties. Laat het medium invriezen in een doos droogijs. Zodra het weefsel in de gewenste positie is gestabiliseerd, vult u de rest van de mal op voordat het OCT volledig bevriest.Bewaar de schimmel bij 80 graden Celsius gedurende ten minste een uur voordat u het weefsel snijdt met behulp van een cryostaat. De mate van cryoinjury op verschillende dagen na cryoinjury, of DPCI, werd geanalyseerd in de caudale steelsecties met behulp van trichrome kleuring bestaande uit Aniline Blue, Acid Fuschin en Orange-G. De beschadigde gebieden werden bepaald door de afwezigheid van oranje vlekken.Bij 4 en 7 dpci vertoonde de dwarsdoorsnede uitgebreid gedegenereerde skeletspieren in de cryogewonde flank van het lichaam. Immunofluorescentieanalyse toonde aan dat, bij 4 DPCI, de gewonde kant van de caudale steel overvloedige DAPI-positieve cellen bevatte, maar weinig tot geen F-actine en tropomyosine 1, wat wijst op gedegenereerde spieren. Bij 7 dpci konden tropomyosine 1 en F-actine in de wond worden gedetecteerd, dicht bij de verticale middellijn van het lichaam, wat wijst op het begin van de vorming van nieuwe myofiber.Bij 30 dpci vertoonden beide zijden van het lichaam een vergelijkbare verdeling van F-actinekleuring, wat wijst op efficiënt herstel van de skeletspieren.

Research

JoVE Journal

Biology

Collection, Fixation, and Mounting of Caudal Penduncle from Zebrafish after Cryoinjury

Caudal Peduncle Cryoinjury in Adult Zebrafish

A Cryoinjury Model for Studying Skeletal Muscle Regeneration of the Caudal Peduncle in Adult Zebrafish (Video) | JoVE 

Een cryoletselmodel voor het bestuderen van skeletspierregeneratie van de caudale steel bij volwassen zebravissen

Skeletal muscle undergoes renewal and restoration after minor injury through the activation of satellite-like stem cells. Severe injuries of the ...

Performing Muscle Cryoinjury on a Zebrafish

Performing Muscle Cryoinjury on a Zebrafish (Video) | JoVE 

Het uitvoeren van spier cryoletsel op een zebravis