Börja med att mala 10 milligram frystorkad Mycobacterium paratuberculosis till ett fint pulver med en mortel och stöt. Tillsätt fem milliliter ofullständig Freunds adjuvans för att erhålla en 10 milligram per milliliter stamlösning. Förvara lagret på minus fyra grader Celsius.
Före immunisering, späd stamlösningen. Späd sedan MOG 35-55-peptiden till två milligram per milliliter och förvara den vid minus 20 grader Celsius. Blanda lika stora volymer MOG 35-55 med adjuvansen i ett fem milliliter rör med en homogenisator tills en tjock emulsion bildas.
Efter var 10: e sekund av blandning, placera lösningen på is i 20 sekunder och snurra röret för att återvinna all lösning. Överför emulsionen till en en milliliter spruta, se till att den är fri från luftbubblor. Montera den sedan med en 27-gauge nål.
Subkutant injicera 200 mikroliter av emulsionen i nedre delen av ryggen på en bedövad mus. Injicera sedan intraperitonealt en dos kikhostetoxin på dag noll och två efter immunisering. Alla möss manifesterade en akut monofasisk sjukdom, kännetecknad av en enda topp av funktionshinder observerad vid 14 till 17 dagar, följt av en partiell återhämtning av symtom under de närmaste 10 dagarna.
Möss immuniserade med M. paratuberculosis visade en tidigare debut efter immunisering och större svårighetsgrad i den akuta fasen. Båda grupperna visade liknande kroppsvikter. Proliferationsanalys med titrerad tymidinininkorporering utförd på EAE-mössens mjältceller visade ett starkt proliferativt svar på peptiden MOG 35-55, men inte på ovalbumin.
Cytofluorometrisk analys visade ökade T-lymfocyter, dendritiska celler och monocyter i mjälten hos M.paratuberculosis-immuniserade EAE-möss jämfört med CFA-immuniserade möss. Hematoxylin och och eosin vävnadsanalys avslöjade typisk paravaskulär och meningeal mononukleär inflammatorisk infiltration i hjärnan och ryggmärgen.