약물 처리된 Hep-3B 세포를 이미징한 후 colocalization 플러그인을 사용하여 이미지 J의 컨포칼 이미지를 엽니다. 이미지 J 서버에서 ND 파일을 열고 대화 상자에서 채널 분할 옵션을 선택합니다. 녹색 및 빨간색 이미지로 작업합니다.
이미지를 클릭하고 복제를 선택하거나 키보드 단축키 Shift 플러스를 사용하여 배경을 줄이 D.To 고, 다른 이미지 복제본을 생성하고, 롤링 반경이 100인 배경을 빼고, 배경 만들기 옵션을 선택하여 주어진 이미지 배경으로 이미지를 생성함으로써 원본 이미지를 그대로 유지하기 위해 이러한 이미지의 복제본을 생성합니다. 그런 다음 프로세스로 이동합니다. 이미지 계산기를 클릭하고 두 번째 복제된 이미지에서 첫 번째 복제된 이미지를 뺍니다.
결과 이미지를 colocalization 분석에 활용합니다. colocalization 플러그인을 사용하려면 이미지를 클릭하고 유형을 선택한 다음 8비트를 선택하여 녹색 및 빨간색 채널 이미지를 8비트로 변환합니다. 그런 다음 플러그인을 클릭하고 colocalization을 선택합니다.
미토콘드리아와 리소좀 신호의 colocalization을 측정하려면 비율을 75%로 설정하고 임계값 빨간색 채널을 80.0으로, 임계값 녹색 채널을 50.0으로 설정합니다. colocalized puncta를 포함하고 RGB 이미지에 3개의 8비트 이미지를 결합한 8비트 이진 이미지가 생성됩니다. 이 이미지를 8비트 이미지로 변환합니다.
셀의 관심 영역을 얻으려면 colocalized 점의 이미지를 선택하여 셀 영역을 강조 표시하는 이미지를 생성합니다. 전체 셀 영역을 선택하려면 결과 colocalized 포인트 이미지를 선택하고 이미지를 클릭하고 임계값을 조정한 다음 임계값을 설정하여 모든 셀 영역이 강조 표시되도록 합니다. 셀의 영역을 분석하려면 분석을 선택하고 입자 분석을 클릭한 다음 입자 분석의 기본 설정인 0에서 무한대까지 이미지의 모든 입자를 측정합니다.
colocalized 미토콘드리아와 리소좀의 영역을 분석하려면 colocalized 8비트 이미지를 선택합니다. 그런 다음 분석을 선택합니다. 입자 분석을 클릭하고 0.1625제곱마이크로미터에서 4제곱마이크로미터 사이의 반점의 합을 측정합니다.
colocalized 미토콘드리아와 리소좀의 면적을 전체 세포 면적으로 나누어 colocalized puncta를 측정합니다. Hep-3B 세포의 공초점 이미지는 미토콘드리아와 리소좀의 공동 국소화를 나타냈습니다. VL 850 및 FCCP는 Hep-3B 세포에서 유의한 미토파지를 유도하였다.
