Name: Fluorescence Intensity Quantification of Transfected HeLa Cells Using ImageJ (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-05-12T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence Intensity Quantification of Transfected HeLa Cells Using ImageJ at JoVE.com

fluorescence intensity quantification of transfected hela cells using imagej

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence Intensity Quantification of Transfected HeLa Cells Using ImageJ at JoVE.com

Fluorescence Intensity Quantification of Transfected HeLa Cells Using ImageJ (Video) | JoVE 

Fluorescentie-intensiteitskwantificering van getransfecteerde HeLa-cellen met behulp van ImageJ

Om de fluorescentie-intensiteit van de getransfecteerde HeLa-cellen in ImageJ-software te meten, klikt u op bestand en selecteert u openen. Selecteer in het dialoogvenster de afbeeldingsbestanden voor het experiment en klik op OK. Zodra het venster met importopties voor bio-indelingen verschijnt, selecteert u gesplitste kanalen en klikt u op OK.In tetramethylrhodamine, ethylester, perchloraat of TMRE-experimenten is YFP het eerste kanaal, MitoTracker het tweede kanaal en TMRE het derde kanaal. Pas de helderheid aan door de afbeelding te selecteren, vervolgens aan te passen en vervolgens de helderheid. Laad vervolgens de opgeslagen regio van interesse of ROI door te klikken op analyseren, vervolgens op tools en vervolgens op ROI-manager.Klik in de ROI-manager op meer, open vervolgens in de lijst en selecteer de opgeslagen ROI. Meet vervolgens de fluorescerende intensiteit van vijf willekeurige gebieden in een enkele cel door de opgeslagen ROI van de ROI-manager te selecteren en de ROI naar een willekeurige locatie in een cel te verplaatsen. Om de fluorescentie-intensiteit te meten, drukt u op M op het toetsenbord en herhaalt u dit met vier extra niet-overlappende gebieden.Wanneer een dialoogvenster met de grijze waarden van het gebied en het gemiddelde wordt weergegeven, kopieert en plakt u de waarden in een spreadsheet voor analyse. De resultaten voor de fluorescentie-intensiteiten TMRE en MitoSOX toonden aan dat hun behandeling met het bekende ontkoppelingsmiddel CCCP de TMRE-fluorescentie-intensiteit verminderde in vergelijking met de controleomstandigheden. Bovendien induceerde 20 micromolaire CCCP-behandeling de productie van superoxide en verhoogde de MitoSOX-fluorescentie-intensiteit.In milde of vijf micromolaire CCCP-stressomstandigheden resulteerde de expressie van Parkin wild-type en Parkin T240R in een hogere TMRE-intensiteit in vergelijking met de lege YFP-controlevector. De MitoSOX-intensiteit was lager in cellen die Parkin wild-type en Parkin T240R tot expressie brachten in vergelijking met cellen die de YFP-controlevector tot expressie brachten, wat suggereert dat Parking-expressie helpt de gezondheid van het mitochondriale netwerk te behouden door hogere mitochondriale membraanpotentialen en lage superoxideniveaus te behouden.

Research

JoVE Journal

Biology

Fluorescence Intensity Quantification of Transfected HeLa Cells Using ImageJ

Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells (Video) | JoVE 

Op fluorescentie gebaseerde kwantificering van mitochondriale membraanpotentiaal en superoxideniveaus met behulp van live beeldvorming in HeLa-cellen

Mitochondria are dynamic organelles critical for metabolic homeostasis by controlling energy production via ATP synthesis. To support cellular metabolism, ...

Biological Samples Preparation for Confocal Microscopy, Image Acquisition Setup, and Confocal Microscopy Imaging

Biological Samples Preparation for Confocal Microscopy, Image Acquisition Setup, and Confocal Microscopy Imaging (Video) | JoVE 

Biologische monstervoorbereiding voor confocale microscopie, beeldacquisitie-instellingen en confocale microscopiebeeldvorming