Name: Mouse Retina Isolation and Flattening (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-07T12:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Retina Isolation and Flattening at JoVE.com

mouse retina isolation and flattening

Methanol-Based Whole-Mount Preparation for the Investigation of Retinal Ganglion Cells

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Retina Isolation and Flattening at JoVE.com

Mouse Retina Isolation and Flattening (Video) | JoVE 

Isolering og sammenslåing av netthinnen på musen

Etter å ha festet det enucleated øyebollet til den euthaniserte musen, overfør den til et lysbilde og legg det under et dissekerende mikroskop. Bruk tang, klem kanten av hornhinnen for å forhindre øyebevegelse. Med dissekerende saks, kutt rundt hornhinnen på en dybde på omtrent en millimeter gjennom hornhinnen skleral limbus, og fjern deretter linsen og glasslegemet.Hold den optiske platen i midten, kutt netthinnen radialt langs de fire kvadranter, og når omtrent 2/3 av netthinnens radius. Klem en av sklerkantene ved hjelp av tannede tang. Hold sclera-kanten med untoothed tang og flytt fra tanntangen mot sclera-basen.Skrell netthinnen forsiktig. Våt netthinnen med 200 mikroliter PBS ved hjelp av en pipette. Fjern overflødig PBS med absorberende papir, og flat netthinnen med en liten børste om nødvendig.Tilsett sakte kald metanol dråpe for dråpe på netthinnens indre overflate til den dekker helt. Når netthinnen blir hvit og utvikler økt fasthet, flat forsiktig netthinnen og fjern urenheter, for eksempel gjenværende pigmentmembraner og glasslegemet, med en liten børstebørste. Etter å ha invertert netthinnen, behandle den med metanol som tidligere demonstrert, og overfør den til en brønnplate med 24 brønner, Soak den i metanol og oppbevar den ved 20 grader Celsius i en til to timer for umiddelbar immunfarging.Skyll deretter netthinnen med PBS etter å ha fjernet metanol fra platen. Retinolganglioncellene i netthinnene før og etter metanolbehandling ble visualisert ved hjelp av konfokalmikroskopi, noe som indikerte at de 12 månedene med metanolkonservering ikke påvirket RGC-immunfargingen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Mouse Retina Isolation and Flattening

Mouse Retina Isolation and Methanol Treatment for Studying Retinal Ganglion Cells

Methanol-Based Whole-Mount Preparation for the Investigation of Retinal Ganglion Cells (Video) | JoVE 

Metanolbasert helmonteringspreparat for undersøkelse av retinale ganglionceller

Retinal ganglion cells (RGCs), which are the projection neurons of the retina, propagate external visual information to the brain. Pathological changes in ...