Отфильтруйте сырые белки, извлеченные из кишечника Sipunculus nudus, через фильтрующую мембрану толщиной 0,22 микрометра. Храните этот образец при температуре четыре градуса Цельсия для последующего использования. Упакуйте колонку аффинной хроматографии с агарозным матриксом, загрузив среду с агарозным матриксом аргинина в пустую хроматографическую колонку объемом пять миллилитров.
Аналогично загрузите колонку аффинной хроматографии с аффинным матриксом лизина и агарозы, загрузив среду с лизиновой агарозной матрицей в пустую хроматографическую колонку. Уравновесить аффинные хроматографические колонки с помощью дважды дистиллированной воды с последующим добавлением трис гидрохлоридного буфера. Загрузите отфильтрованный образец белка в предварительно уравновешенную колонку.
Промойте колонку пятью объемами 0,02-молярного трисохлоридного буфера перед тем, как вымыть ее 0,15-0,25-0,35-0,45-0,55-и 0,65-молярными растворами натрия хлорида, последовательно. Как только в 0,15-молярном элюировании хлорида натрия появится пик элюирования, соберите фракции в пятимиллилитровые пробирки. Сконцентрируйте образец элюирования с помощью ультрацентробежного фильтра мощностью три килодальтона и храните этот образец при температуре минус 80 градусов Цельсия для последующего использования.
Когда белковый раствор был загружен в колонку аффинности аргинин-агарозной матрицы, пик протекания появлялся примерно от 40 до 66 минут. На стадии градиентного элюирования элюирование 0,15-молярным хлоридом натрия достигало пика примерно от 94 до 110 минут. Когда белковый раствор был загружен в аффинную колонку лизина агарозного матрикса, пик протекания появлялся примерно от 38 до 60 минут.
На стадии градиентного элюирования элюирование 0,15-молярным хлоридом натрия достигало пика от 80 до 86 минут.
