Name: Preparation of Stria Vascularis Single-Nucleus Suspension (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-21T12:50:00
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preparation of stria vascularis single-nucleus suspension

Dissection of Adult Mouse Stria Vascularis for Single-Nucleus Sequencing or Immunostaining

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Preparation of Stria Vascularis Single-Nucleus Suspension (Video) | JoVE 

Préparation de la suspension mononucléaire de Stria Vascularis

Homogénéiser le tissu de strie vasculaire disséqué de l’oreille de souris dans un homogénéisateur Dounce de deux millilitres, avec 10 à 20 coups sur la glace. Lyser le tissu sur la glace pendant 25 minutes. Ensuite, filtrez le tissu à travers un filtre de 30 microns et faites tourner le filtrat à 500G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius.Retirer le surnageant et remettre en suspension la pastille de cellule dans un millilitre de tampon de lavage et de remise en suspension des noyaux. Ensuite, filtrez les cellules à travers un filtre de 10 microns et centrifugez à 500 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Retirer le surnageant et remettre en suspension dans 50 microlitres de tampon de lavage et de remise en suspension des noyaux.Après coloration au bleu de trypan, diluez cinq microlitres de la suspension cellulaire dans 50 microlitres de 1X PBS et comptez les cellules. Pour préparer des captures de noyaux uniques, chargez l’échantillon avec la densité nucléaire souhaitée sur la puce.

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